帕金森氏病(PD)是神经系统锥体外系常见的慢性退行性疾病。主要病理变化是位于中脑黑质的多巴胺(DA)能神经元变性和消失,导致纹状体的DA能神经纤维终末变性消失,这种黑质-纹状体神经传导路的损害使得DA水平下降,由此产生了PD的典型症状。目前,临床上对PD治疗的研究主要集中在两个方面:一是以补充多巴胺的不足为目的药物治疗:如给病人定期服用左旋多巴,美多巴,息宁,安坦等,通过药物治疗病人的大多数临床症状改善,但并不能阻止病情的发展,即不能治愈。另一种方法是以抢救幸存神经元为目的的治疗:如导入神经营养因子的基因治疗。 脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophie factor,BDNF)作为神经生长因子家族成员,与神经系统发育有着密切关系,不仅对中枢神经元的发育、增殖分化、存活起重要作用,而且对损伤后神经元的修复与功能重塑也起了重要作用。近年来神经生长因子家族一些成员纷纷被克隆并应用于中枢神经系统退行性疾病的防治。 针对上述研究趋势,本研究采用脑皮质-纹状体-黑质三组织联合培养技术,选用脑源性神经营养因子(BDNF)通过RT-PCR及载体克隆的方法,构建BDNF真核表达载体pEGFP-N1-BDNF,以重组质粒pEGFP-N1-BDNF作为外源性基因,与脂质体一起转染骨髓基质干细胞(BMSCs),通过荧光显微镜观察,并结合BDNF免疫细胞化学染色等形态学方法鉴定稳定表达BDNF蛋白的基因工程细胞,检测其对体外联合培养脑片生长的影响。 材料与方法 (一) 大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)体外培养及向神经元诱导分化研