【摘 要】
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本实验以东北林蛙（Rana dybowskii）为研究材料,利用毕赤酵母GS115真核表达系统构建东北林蛙皮肤抗菌肽重组表达体系,分析评价重组dybowskin-1ST对六种常见致病菌大肠埃希氏菌（E.coli）、绿假单胞菌（P.aeruginosa）、肠炎沙门氏菌（S.enteritidis）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）、蜡状芽孢杆菌（B.cereus）、市炎克雷伯氏杆菌（K.pneum
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本实验以东北林蛙（Rana dybowskii）为研究材料,利用毕赤酵母GS115真核表达系统构建东北林蛙皮肤抗菌肽重组表达体系,分析评价重组dybowskin-1ST对六种常见致病菌大肠埃希氏菌（E.coli）、绿假单胞菌（P.aeruginosa）、肠炎沙门氏菌（S.enteritidis）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）、蜡状芽孢杆菌（B.cereus）、市炎克雷伯氏杆菌（K.pneumoniae）的抗微生物特性。本实验采用TRIzo1法提取蛙皮肤总RNA, RT-PCR技术扩增获得皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因,目的基因与His6双链连接为His6-dybowskin-1ST,将其克隆至质粒pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-1ST。pPIC9K-1ST电转化入毕赤酵母菌GS115中,筛选高表达dybowskin-1ST重组菌株。甲醇诱导重组菌株表达上清液,SDS-PAGE电泳检测其目的肽dybowskin-1ST的分泌表达。Ni-Agarose色谱柱分离纯化目的肽,HPLC鉴定其分离纯化效果。微生物活性检测结果显示,重组dybowskin-1ST对E.coli、P.aeruginosa、S.enteritidis、S.aureus、B.cereus、K.pneumoniae均有较好抗菌活性。本研究成功构建了东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST真核表达体系,并获得了稳定表达。抗微生物试验结果显示用基因工程法体外表达的重组dybowskin-1ST对G+和G-细菌均具有较强的抑杀作用,表明东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST具有良好的广谱抗菌活性和潜在的研发价值。
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