浒苔多糖的分离、纯化及活性研究

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本论文以浒苔(Enteromorpha prolifera)为研究对象,首先对浒苔的营养成分粗纤维、氨基酸及元素含量进行了分析,然后通过热水提取法和碱液提取法从浒苔中分别提取得到水提粗多糖WEP和碱提粗多糖AEP,利用DEAE-52 Cellulose和Sephadex G-100对两种粗糖聚物进行分离纯化,并结合红外(FT-IR)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、高效液相色谱(HPLC)、核磁(NMR)等技术手段对10个精糖聚物进行了一级结构解析,使用扫描电镜(SEM)观察精糖聚物表面形貌,刚果红实验对其高级结构进行了初步研究。论文同时利用DPPH自由基、超氧阴离子自由基(·O2-)和ABTS自由基清除实验评价了精糖聚物的体外抗氧化活性,采用MTT法对浒苔精糖聚物对MGC-803(人胃癌细胞)、Bel-7402(肝癌细胞)、T24(人膀胱癌细胞)、Hep G2(人肝癌细胞)的抑制活性进行了研究。水提粗糖聚物WEP经DEAE-52 Cellulose和Sephadex G-100分离纯化后得到6种精糖聚物,分别为PWEP-1、PWEP-2、PWEP-3、PWEP-4、PWEP-5和PWEP-6,针对分离得到的量较多的4种水提糖聚物进行了结构鉴定和药理活性研究。HPGPC结果显示4种水提精糖聚物(PWEP-1、PWEP-3、PWEP-5和PWEP-6)的分子量分别为4259 Da、186056 Da、225267 Da和136817 Da;碱提糖聚物AEP分离纯化后得到6种精糖聚物,分别为PAEP-1、PAEP-2、PAEP-3、PAEP-4、PAEP-5和PAEP-6,分子量分别为34377 Da、22905 Da、64151 Da、120062Da、48161 Da和105283 Da。HPLC结果显示PAEP-4和PAEP-5中鼠李糖含量最多,PWEP-6、PAEP-1、PAEP-2和PAEP-3中半乳糖醛酸含量最多,PWEP-5葡萄糖醛酸含量最多,PWEP-3葡萄糖含量最多,PAEP-6中木糖最多。单糖组成分析结果表明PAEP-5不含醛酸类单糖,为中性糖聚物,其余为酸性糖聚物。刚果红实验和扫描电镜对精糖聚物的高级结构初步研究,刚果红实验结果显示10种精糖聚物均不含有三股螺旋结构。扫描电镜下精糖聚物呈现不同的形态,这可能与提取方式、洗脱液的浓度以及分子量、单糖组成等因素有关。NMR结果显示PWEP-5中存在α-D-Glcp A、β-D-Glcp、α-D-Galp、α-D-Manp和α-D-Rhap残基;PAEP-2以→4)-α-Galp A-6-OMe-(1→为主链骨架,支链包含α-D-Manp-6-OMe-(1→、→3,5)-α-D-Araf-(1→和β-D-Glc A-(1→残基,是来自细胞壁的果胶糖;PAEP-4中具有α-L-Rhap-(1→骨架。利用DPPH、·O2-和ABTS自由基清除实验研究了精糖聚物的体外抗氧化活性,10种精糖聚物均表现出较好的抗氧化活性,且对三种自由基DPPH、·O2-和ABTS的清除能力展现出浓度依赖性关系,其中水提精糖聚物中,PWEP-5对DPPH、·O2-、和ABTS三种自由基的清除作用最明显,对三种自由基的清除率分别为57.27%、52.92%和66.53%;碱提精糖聚物中PAEP-1和PAEP-2对三种自由基的清除作用最强,PAEP-1对三种自由基的清除率分别为56.40%、54.27%和42.07%,PAEP-2对三种自由基的清除率为48.67%、52.92%和48.20%。体外抗氧化结果表明,分子量较低和糖醛酸含量较大的糖聚物糖聚物具有更强的抗氧化活性。MTT实验结果表明精糖聚物对人胃癌细胞(MGC-803)、肝癌细胞(Bel-7402)、人膀胱癌细胞(T24)和人肝癌细胞(Hep G2)的抑制率均低于50%,表明精糖聚物对肿瘤细胞不具有明显的抑制作用,与糖聚物中不含有三股螺旋结构有关。
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