目的：动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的形成是多因素参与的复杂过程，迄今仍有许多细节机制有待阐明。近年来，基因表达的表遗传(epigenetic)调控异常被发现在AS发病机制中占有重要的一席。资料显示在AS的发生、发展过程中出现整体基因组低甲基化，而某些特定基因启动子区CpG岛甲基化程度增加。低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor，LDL-R)异常在AS发生中占有举足轻重的地位，有关LDL-R基因突变的研究报导很多，并显示其与家族性高胆固醇血症、AS之间明确的因果关系。但有关LDL-R基因启动子区的甲基化修饰在AS病人是否出现异常、及其与AS的关系研究却迄今未见报导。对AS病人的表遗传研究显示，AS患者粥样斑块中雌激素受体α(estrogen receptor-α，ER-α)基因的甲基化水平显著增高，及ER-α的表达下调。Kortelaine用ER的单克隆抗体检测发现，绝经前的女性AS患者的ER-α表达降低，提示ER-α基因表达沉默与AS形成间的相关性。但何种致病因素导致AS病人ER-α基因高甲基化亦未见报导。高同型半胱氨酸(high homocysteine，Hhcy)血症已被确立为AS的独立危险因子，有关同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)致病机制的研究报导很多，但多集中于其引起的氧化应激损伤。上世纪九十年代后期，P．E Newman提出Hcy导致异常甲基化推动AS形成，理由是过多的Hcy影响DNA甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine，SAM)的合成。从而将AS、Hcy和甲基化三者之间的关系联系在一起。因此，本研究拟选定与AS关系最紧密的LDL-R、ER-α，探讨AS病人LDL-R、ER-α基因启动子区CpG岛甲基化的改变及其与Hhcy的内在关系。以期为深入研究AS的发病机制提供一个全新的视角。本研究分两部分对上述问题进行研究，即：AS病人外周血细胞基因组LDL-R基因启动子区的甲基化异常；AS病人ER-α基因启动子区甲基化、高同型半胱氨酸血症与AS的发病。方法：入选61例AS病人和28例健康对照者，行颈部血管彩超检查证实AS病人颈部血管均有AS斑块形成而健康对照者无。所有研究对象均采集肘静脉血提取基因组DNA，改进并联合应用巢式、Touchdown-PCR，甲基化敏感单链构象分析法(methylation-sensitive-single-strand conformation analysis，MS-SSCA)，对61例AS病人及28例健康对照者的LDL-R基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测。82例研究对象分为AS组(54例)和对照组(28例)，所有入选对象均行颈部血管彩超检查，记录颈动脉内膜中层厚度(carotid intima-media thickness，CIMT)及有无斑块形成，采用Crouse氏方法计算颈动脉斑块积分。采集清晨空腹肘静脉血3ml，其中2ml用来提取基因组DNA，1ml血用来检测血总同型半胱氨酸(total homocysteine，tHcy)水平，巢式甲基化特异性PCR(nested-methylation-specific PCR，nMSP)法检测研究对象ER-α启动子区CpG岛的甲基化状态，荧光生化法检测血tHcy水平，spearman等级相关分析甲基化程度与tHcy的相关关系。结果：在61例AS患者中，LDL-R基因启动子区发现三种不同的甲基化模式，即完全甲基化、部分甲基化和非甲基化。61例AS患者中有2例LDL-R基因启动子区完全甲基化，13例部分甲基化，其余为非甲基化，甲基化率为24.59％；28例正常对照者中仅1例发生部分甲基化，甲基化率为3.57％。两组甲基化率差异有显著性(p＜0.05)。54例AS患者中有38例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化，甲基化率为70.4％；28例健康对照者中有8例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化，甲基化率为28.6％；两组甲基化率差异有统计学意义(P＜0.05)。同时，AS组tHcy水平显著高于对照组(P＜0.05)，经spearman等级相关分析，ER-α基因启动子区甲基化程度与血tHcy水平相关系数为r=0.809；且随血tHcy水平升高，AS病损程度亦递次加重。结论：AS病人LDL-R基因启动子区甲基化程度增高，在LDL-R基因调控区的高甲基化修饰可能参与了AS的发病。同时，改进并联合应用的巢式PCR、Touchdown-PCR，MS-SSCA法降低了对DNA模板严格度的要求，提高了灵敏度和特异性，在检测基因甲基化中具有方便、经济、效率高的优点，有良好的应用前景。AS患者ER-α基因启动子区CpG岛高度甲基化，且甲基化程度与血tHcy浓度呈正相关，并与AS病损程度正相关。提示高Hcy血症很可能通过干扰ER-α基因的甲基化而促进AS的发生、发展。