雌激素通过激活其受体而调节生殖系统的分化和维持生殖系统、骨骼和其他组织的功能。雌激素作为一种有丝分裂原,可促进正常乳腺组织和乳腺癌细胞的繁殖。相反,转化生长因子β(TGF-β)是上皮细胞生长周期的抑制剂,并对抗雌激素受体有丝分裂原的作用。我们实验室已证明Smad4,一个共用的TGF-β信号的转导物,具有雌激素受体转录的协同抑制因子的功能。 本课题进一步研究Smad4与ERα相互作用有抑制乳腺肿瘤生长的功能。为此,我们选择4个常用的乳腺癌细胞系(T47D,MCF7,MDA—MB—231和MDA—MB—468),以比较它们的特性。用△ μ 3 Smad4和GFP病毒表达载体分别转染MCF-7,T47D,MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,获得了8个重组稳定细胞株(MCF7—GFP和MCF7—Smad4;T47D—GFP和T47D—Smad4;MDA—MB—231—GFP和MDA—MB—231—Smad4;MDA—MB—468—GFP和MDA—MB—468—Smad4)。另外还将pMSCV ERα和GFP转染到ERα阴性的MDA-MB-231细胞建立另外的稳定细胞株(MDA—MB—231—GFP和MDA—MB—231—ERα)。采用Hetchest 33342染色和流式细胞仪检测细胞凋亡现象;Western Blot用于检测蛋白的表达;免疫荧光双标记技术观察Smad4和ERα的细胞定位。另外,采用裸鼠作为动物模型研究Smad4的抗肿瘤作用。Western Blot和免疫组织化学染色观察肿瘤移植物蛋白的变化。