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前言 随着静脉移植在周围动脉缺血性疾病中的广泛应用,内膜增生所引起的移植静脉再狭窄成为影响术后远期效果的主要因素。血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移及凋亡在再狭窄的过程中起重要作用。肿瘤抑制因子PTEN(phosphotase and tensin homolog deleted on chromosome ten)是1997年新发现的一种具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酶双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN能逆转P13K/Akt信号途径,在细胞增殖过程中起负性调控作用。此外,PTEN还部分抑制FAK及ERK/MAPK信号途径。PTEN与细胞的生长、分化、粘附、迁移、凋亡等过程密切相关。本实验将以Wister大鼠颈静脉移植到腹主动脉的自体静脉移植动物模型为基础研究在静脉移植术后的血管中PTEN蛋白的表达情况,作为将PTEN应用于临床治疗移植静脉再狭窄的基础。 方法 将250克左右,雌雄各半,3个月龄的Wistar大鼠48只,随机分成6组,每组8只。在显微镜下行无菌显微外科操作,建立自体颈总静脉移植到腹主动脉动物模型。各组分别于术后1、3、7、14、21、28天手术切取移植静脉作为实验组标本,同时取对侧正常静脉作对照。进行下列检测:(1)组织学染色:10%中性福尔马林固定的标本石蜡包埋,做4μm厚血管横断面连续切片,行HE及Verhoeff弹力纤维染色。光镜下观察组织学形态,并在计算机图像分析仪下分析Verhoeff切片,测量血管内膜厚度。(2)免疫组化染色:应用PTEN多克隆抗体SABC法免疫组化染色,DAB显色,400×光镜下观察,并计算阳性细胞百分比,观察术后不同时间PTEN蛋白的表达情况。