紫花松果菊菊苣酸提取与生物活性研究

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紫花松果菊(Echinacea purpurea L.)即紫锥菊,为菊科松果菊属多年生草本植物。由于其具有增强细胞免疫和体液免疫、抗氧化、抗病毒等作用,目前在世界各地广泛种植并用于各种商业用途。菊苣酸属于咖啡酸衍生物,是紫花松果菊中含量最丰富的酚类化合物之一,也是其主要特征成分和重要的免疫活性成分之一。本文一方面优化了紫花松果菊中菊苣酸的提取、纯化工艺;另一方面研究了菊苣酸对酪氨酸酶的抑制活性及其抗氧化和抗炎活性。具体研究结果如下:1.采用正交试验法优化了紫花松果菊中菊苣酸的提取工艺,进一步通过树脂吸附、乙醇洗脱、萃取等过程纯化菊苣酸,最终确定了最佳提取纯化工艺:15倍量的40%乙醇提取溶液,在70℃下提取3次,每次提取1h;合并菊苣酸提取液过AB-8树脂柱吸附,然后用去离子水洗至流出液无色,再用50%乙醇溶液洗脱;合并树脂纯化后菊苣酸洗脱液,浓缩至原体积的1/10,回收乙醇,用3mol/L盐酸和5%NaOH调溶液pH值为3,用醋酸乙酯萃取4次,收集萃取液,用旋转蒸发器浓缩,60℃下真空蒸干得到浅黄色粉末;最终HPLC法检测其含量为60.23%。2.研究了菊苣酸提取物对酪氨酸酶的活性影响,结果表明菊苣酸提取物对酪氨酸酶活性有不同程度的抑制作用。随着浓度的增加,紫花松果菊中菊苣酸对酪氨酸酶抑制率增大。菊苣酸浓度为20mg/mL时,菊苣酸对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用最大,抑制率为78.25%;菊苣酸浓度为10mg/mL时即可100%抑制酪氨酸酶双酚酶的活性。3.研究了紫花松果菊中菊苣酸提取物的抗氧化活性,以Vc为对照,测定了其对有机自由基(DPPH)、羟基自由基清除能力、脂质体过氧化的抑制作用;同时以BHA、BHT为对照,测定了菊苣酸提取物对菜籽油和猪油的抗氧化作用。结果表明:紫花松果菊菊苣酸提取物能够有效地清除DPPH自由基、羟基自由基,同时能够抑制脂质体过氧化;菊苣酸提取物能显著抑制猪油和菜籽油的氧化和酸败,5g/kg的菊苣酸提取物的抗氧化能力比0.2g/kg的BHT、BHA略高,且其对猪油的抗氧化作用较菜籽油作用强;以上实验中菊苣酸提取物的抗氧化作用均表现出明显的量效关系。4.采用蛋清至足肿胀、腹腔毛细血管通透性小鼠急性炎症及胶原蛋白诱导关节炎大鼠慢性炎症模型,研究了紫花松果菊中菊苣酸提取物的抗炎活性。结果表明:紫花松果菊中菊苣酸提取物能明显抑制蛋清性小鼠足肿胀,且随着菊苣酸提取物浓度的增加,抑制作用增强,有明显的量效关系;菊苣酸提取物能降低醋酸所致毛细血管通透性的增加,对炎症早期的渗出和水肿有显著的抑制作用,且随剂量增大而增强,高剂量组的菊苣酸提取物(40mg∕kg)与阳性对照阿司匹林组的药效基本相同;菊苣酸提取物(8,16,32mg/kg)灌胃给药可以显著抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠原发及继发性足肿胀,恢复CIA大鼠体重减轻以及不同程度地下调CIA大鼠的免疫器官指数,并且能显著抑制CIA大鼠过度分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α和PGE2,也能显著抑制CIA大鼠滑膜组织NF-κBp65,TNFα, Cox-2的水平,这揭示了菊苣酸提取物对CIA大鼠有明显的治疗作用,以及对其滑膜组织亢进的分泌细胞因子的功能有明显改善作用。以上研究结果,为进一步研究紫花松果菊的开发利用提供理论依据和技术支撑。
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