背景及目的:急性髓细胞白血病(AML)经传统化疗达完全缓解后体内仍残留有 108~109个白血病细胞,尽管反复强化治疗,体内仍有微小残留病变(MRD)的存在而成为白血病复发的根源。最大限度的杀灭残留白血病细胞是防止复发,延长缓解期和无病生存期的关键。树突状细胞(DC)在免疫反应中起关键的免疫调节作用,可以激活初始型及静息 T 淋巴细胞,是免疫反应的始动者,可以诱导抗原特异的细胞毒性 T 细胞(CTL)产生。其独特的功能在肿瘤免疫中备受关注,DC自然成为我们研究的靶点之一。最常用的体外诱导树突状细胞的方法是利用细胞因子组合 GM-CSF、IL-4/TNF-α作为诱导因子,但此方法体外诱导生成 DC 一般需要 7~14 天,时间较长,细胞因子用量较大,价格昂贵,存在污染的可能性。国外曾有钙离子载体可以诱导 CD34+造血干、祖细胞,外周血单个核细胞快速生成 DC 的零星报道。本试验旨在探讨利用单一的试剂—— 一种钙离子载体 A23187,将不同亚型的 AML 细胞在体外诱导转化为 DC,并比较钙离子载体与常规的细胞因子组合 GM-CSF+IL-4 诱导 AML 细胞生成 DC 的异同,将为临床培养 DC 提供快速、简便、易行、稳定的新途径。 将 AML 原始细胞转化为 DC(AML-DC),可以纠正 AML 细胞的免疫缺陷,可以递呈所有公认的白血病特异性抗原,因此最大限度的产生白血病特异性CTL,为临床彻底清除AML的微小残留病变(MRD)提供一条新途径,也为 AML 自体干细胞移植提供一种行之有效的体外净化方法。 方法:用密度梯度比重离心法分离 8 例初发的 AML 患者骨髓单个核细胞,以每孔 1×106个细胞在 24 孔板内液态培养,共分 3 组培养, CI 组:A23187 加入含 10%人 AB 血清的 RPMI1640 培养液(完全培养液);CK 组:GM-CSF+IL-4 加入完全培养液;对照组仅含完全培养液。培养 4 天,倒置显微镜及细胞化学染色观察细胞形态变化,流式细胞仪测定培养前后细胞 CD83、CD14、CDW123、HLA-DR 免疫表型的变化;混合淋巴细胞反应采用 MTT 比色法测定 DC 刺激同种异体 T 淋巴细胞增殖能力;并比较 A23187 诱导的 DC 激活的 T 细胞与 IL-2 激活的 T 细胞的杀伤自身白血病细胞活性的异同。 结果:1.培养四天后,CI 组和 CK 组细胞有相似的变化,细胞体积变大,形态由圆形变为不规则形,细胞周围出现树突状伪足。 CI诱导组与 CK 组相比,细胞体积更大,细胞周围树枝状突起更明显。CI 组出现上述变化的细胞占 30%～60%左右,而 CK 组不足 30%,对照组细胞生长缓慢,且形态变化不大,未见树突样细胞出现。 2.DC 的免疫表型测试中 CI 组和 CK 组与对照组相比 CDW123、HLA-DR表达明显上调,CD14 表达下调。DC 成熟特异性标记 CD83 在 CI 组明显上调,但是 CK 组 CD83 无变化。 3.A23187 诱导的 DC 对同种异体 T 淋巴细胞刺激作用远高于 CK 组及对照组,且随 DC 细胞数量的增加刺激 T 淋巴细胞增殖的活性增强。 4.CTL 活性测试中可见 A23187 诱导的 AML-DC 刺激自体 T 细胞使其抗自身白血病的活性明显增强。当效靶比例为 50:1 时,A23187 诱导的 AML-DC 激活的 T 细胞与 IL-2 激活的 T 细胞其抗自身白血病的活性有明显的差异(P<0.05)。 结论:1.利用单一试剂钙离子载体 A23187,体外可以将 AML 细胞诱导转化为形态、表型和功能上符合 DC 特征的细胞。 2. CI 组诱导 AML 细胞 4 天内即可生成 DC,且生成 DC 高表达成熟特异标记 CD83,而 CK 组至少需 7 天,且生成的 DC 中 CD83 阳性细胞低表达。