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[背景]中国已经跨入老龄化社会。衰老以及衰老相关疾病成为日趋严重的医学问题和社会难题。阐明衰老机制、干预衰老进程具有重要的现实意义。中医药学对于延缓衰老有着深刻的理论阐述和丰富的实践经验,其中“补肾延缓衰老”占主要地位。本课题组在肾虚证研究的过程中,已经揭示淫羊藿总黄酮(Epimedium Flavoniods,EF)是补肾方及单味中药淫羊藿延缓衰老的主要药效成分。为评价EF延缓衰老的效果并探索其作用机制,我们引进国际上衰老研究领域的主要模式生物秀丽线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)进行研究。秀丽线虫生命周期短,可重复大样本寿命实验,并且与其寿命相关的遗传和环境背景较清晰,非常适合进行衰老干预效果的评价和机制研究。在秀丽线虫上进行的寿命分析实验、生殖能力测试和压力应激测试所得之指标可构成简单的药物干预衰老评价系统,并可对药物作用机制进行初步探索。[目的]通过秀丽线虫评价EF延缓衰老的作用并初步探讨EF作用机制。[方法]1.药物浓度-效果检测:动物分为EF 0mg/L(正常对照组)、25mg/L、50mg/L、100mg/L组进行寿命实验以选出EF作用的有效剂量。2.寿命分析实验:动物分为正常对照组、CR组(阳性对照)、EF最佳剂量组(以下简称EF组)进行寿命实验,并对正常对照组及EF组的生存曲线进行动力学分析,评价EF延长线虫寿命的效果。3.生殖能力测试:动物分为正常对照组及EF组,进行生殖能力测试,检测EF是否在延长线虫寿命的同时影响其生殖能力。4.压力应激实验:动物分为正常对照组及EF组,进行急性热应激实验、急性氧化应激实验,佐证寿命实验同时检测EF是否通过提高线虫压力应激能力延长线虫寿命。[结果]1.EF浓度-效果检测:①平均寿命(单位天):0mg/L组20.48±5.52(n=50),25mg/L组23.73±4.75(n=52),50mg/L组29.04±6.39(n=56),100mg/L组22.55±4.49(n=58)。②最大寿命(单位天):0mg/L组30.8±1.1(n=5),25mg/L组32±2(n=5),50mg/L组41.67±2.9(n=6),100mg/L组30.7±1(n=6)。25mg/L、50mg/L、100mg/L组的平均寿命均长于正常组(P＜0.05),以50mg/L组最为显著(P＜0.01);仅50mg/L组的最大寿命长于正常组(P＜0.01)。2.寿命分析实验:①平均寿命(单位天):正常对照组20.48±5.52(n=50),CR组26.52±5.08(n=50),EF组29.04±6.39(n=56)。②最大寿命(单位天):正常对照组30.8±1.1(n=5),CR组36±2(n=5),EF组41.67±2.9(n=6)。EF组的平均寿命和最大寿命均长于CR组(P＜0.05)。对正常组及EF组的生存曲线进行动力分析显示,EF能推迟线虫进入死亡期,降低年龄特异死亡率。3.生殖能力测试:①产卵总数:正常对照组211.9±38.73(n=10),EF组198.8±42.5(n=13),两组相比无统计学意义(P＞0.05)。②生殖峰期(性成熟后第2和第3天)产卵数:正常对照组120±23.24(n=10),EF组149±22.67(n=13),EF组产卵数量多于正常组(P＜0.01)。4.压力应激实验:①急性热应激实验中线虫平均生存时间(单位小时):正常对照组6.71±1.3(n=19),EF组8.93±1.6(n=21),EF组存活时间长于正常组(P＜0.01)。②急性氧化应激实验中线虫平均生存时间(单位小时):正常对照组6.97±1.26(n=20),EF组8.945±2.0(n=20),EF组存活时间长于正常组(P<＜0.01)。[结论]1.EF在一定浓度范围内延缓线虫衰老,效果优于CR。2.EF延长寿命同时不损害生殖能力,相反,EF具有促生殖峰期的作用。3.EF提高线虫的压力应激能力为其延长线虫寿命的机制之一。