研究目的胃癌是全球常见的恶性肿瘤之一,是我国第二大导致死亡的恶性肿瘤。随着胃镜普查、治疗方案的联合应用及分子靶向治疗的发展,胃癌患者的生存期有所延长,但进展期患者的5年生存率仍不容乐观。因此,探寻新的分子生物学标志物对于提高胃癌诊断的准确性、提供胃癌治疗的新靶点以及判断患者预后有着至关重要的意义。COP9信号复合体(COP9 signalosome,CSN)是一种与植物光形态发生调节相关的结构高度保守的多亚基蛋白复合体,最早在拟南芥突变体中发现。在哺乳动物中,CSN包括八个亚单位,依次命名为CSN1～CSN8。该复合体不仅在结构上与26S蛋白酶体的19S亚单位"盖子"部分具有同源性,在功能上也有相似之处,故CSN在泛素化-蛋白降解途径中具有重要的调节作用。CSN6作为CSN的一个重要亚基,涉及胚胎发育、细胞周期调控和信号转导等多种生物学功能。近年来,随着对CSN6研究的深入,其与肿瘤的相关性成为研究的热点。CSN6主要通过调控泛素化介导的蛋白质降解,影响蛋白质的稳定性,而参与肿瘤的发生与发展。据文献报道,CSN6在多种恶性肿瘤中呈高表达(例如:乳腺癌,卵巢癌,结肠癌),且CSN6有望成为结肠癌潜在的预后标志物。鉴于CSN6在胃癌中尚未有所报道,本研究旨在探讨CSN6在胃癌细胞系和组织中的表达,分析CSN6与临床病理参数的关系及其对胃癌患者预后的影响,为胃癌的临床辅助诊断、靶向治疗提供可靠的实验室依据。研究方法1.运用cBioportal网络分析工具对TCGA数据库(Provisional数据集,Nature 2014的数据集)中CSN6的基因改变频率进行分析。2.运用Western-blotting方法检测CSN6在永生化的正常胃粘膜细胞株及不同胃癌细胞株中的表达情况。3.运用Oncomine数据库分析CSN6 mRNA在不同病理类型的胃癌组织与正常胃黏膜表达的差异性。4.运用免疫组织化学染色的方法检测90例胃癌及相应癌旁组织中CSN6的表达情况,分析CSN6的表达与胃癌临床病理特征之间的关系。应用Kaplan-Meier法对CSN6在胃癌组织中的表达与患者生存期之间的关系进行分析,应用Cox风险比例模型和受试者工作特征曲线(ROC曲线)对CSN6在胃癌中的诊断价值进行评估。5.运用网络在线生存期分析软件Kaplan-Meier plotter对876例胃癌患者中CSN6 mRNA的表达及其与生存期的关系进行分析。结果1.对TCGA,Provisional数据集中393例胃癌患者的基因表达分析结果表明,CSN6出现44.8%的扩增(176/393)。对TCGA,Nature2014数据集中287例胃癌患者的基因表达分析结果表明,CSN6出现42.8%的扩增(123/287)。2.Western blot检测结果显示,与永生化的正常胃黏膜细胞株相比,CSN6在多株胃癌细胞系中也呈高表达(差异有统计学意义,P<0.05)。3.Oncomine数据库分析结果表明,CSN6 mRNA在肠型胃癌,弥漫型胃癌以及混合型胃癌中的表达水平均高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。4.胃癌组织免疫组织化学染色结果表明,CSN6在胃癌组织中的阳性表达率(62.2%,56/90)高于相应癌旁组织中的阳性表达率(41.4%,37/90)(P<0.05)。CSN6的表达水平与患者肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、AJCCTNM分期等指标无明显相关(P>0.05)。5.根据本实验免疫组织化学染色结果,用Kaplan-Meier法分析CSN6蛋白在胃癌中的表达及其与患者生存期之间的关系,结果显示,高表达CSN6的患者生存期短于低表达的患者(P<0.05)。用Cox模型对该组患者进行单因素和多因素变量分析,结果显示CSN6的表达水平与胃癌患者的生存期显著相关,为独立预后因素(P<0.05)。绘制ROC曲线,评估CSN6对胃癌预后判断的准确性,结果显示AUC=0.622(95%CI= 0.513-0.722),敏感性为71.43%,特异性为52.94%。6.分析Kaplan-Meier plotter中876例胃癌患者的CSN6 mRNA的表达水平与总生存期的关系,结果显示,CSN6高表达的胃癌患者比低表达的患者总生存期短(P<0.001),与免疫组化结果一致。结论本研究结果表明,CSN6在胃癌细胞株及胃癌组织中均呈高表达。CSN6的表达水平与胃癌患者的生存期显著相关,对进展期胃癌患者预后作用更显著。CSN6高表达患者比低表达患者的总生存期短,即CSN6高表达者预后较差。提示CSN6可能作为判断胃癌患者预后的潜在生物学指标以及分子靶向治疗的靶点。