目的 严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是一种新型急性传染性疾病,它的高死亡率严重威胁着人类的健康,在2004年仍有病例散发。其病原体是一种新的冠状病毒(SARS Coronavirus,SARS-CoV),来源于野生动物,SARS-CoV是单股正链RNA病毒,基因组全长约29.7kb,纤突蛋白(S)、囊膜蛋白(E)、基质蛋白(M)、及核衣壳蛋白(N)是它的主要结构蛋白。其中S蛋白是SARS-CoV主要的膜结合蛋白,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,在致病过程中S蛋白是主要的毒力因子,在病毒吸附细胞受体、细胞融合及诱导中和抗体产生过程中发挥关键作用。为了预防SARS的再次流行,人们迫切需要一种安全有效的疫苗早日研制成功。目前有许多候选疫苗进入临床前研究,例如:灭活疫苗,DNA疫苗,多肽疫苗等。我们的实验是通过网络数据库结合生物信息学软件分析的方法,确定S蛋白中可能在SARS-CoV感染过程中起重要作用并具有较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位,人工合成嵌合基因,体外表达后免疫家兔,为抗SARS基因工程疫苗的深入研究提供实验依据。 方法 1.抗原表位预测 运用生物信息学对SARS-CoV S蛋白的二级结构,亲水性,穿膜螺旋,N-糖基化位点,氨基酸序列的亲疏水性,表面可及性,分子刚性及抗原性参数进行预测分析,设计抗原表位多肽。 2.基因合成和测序鉴定 设计串联多表位的嵌合基因,命名为CAG,全长1274 bp由大连TaKaRa公司合成及测序验证。 3.CAG嵌合基因的扩增