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凋亡抑制蛋白样蛋白2(Inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)属于凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员,是定位于人19号染色体(q13.3-13.4)上高度保守的基因,其过表达会使细胞迁移、增殖及凋亡失衡,进而促进癌细胞生长。2012年XIANG等利用双向电泳分析乳腺癌患者血清和健康人血清时发现,ILP-2在乳腺癌患者血清中异常高表达。据此我们推测,ILP-2与乳腺癌的发生发展密切相关,进一步探究ILP-2对乳腺癌细胞生长的作用机制,为乳腺癌靶向治疗及研制相应抗癌药物提供理论依据。本研究利用免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中ILP-2的表达,通过分析34例乳腺癌组织及24例癌旁组织,结果显示ILP-2在乳腺癌组织中高表达。采用Western blot检测乳腺细胞(HCC-1937、MX-1、MCF-7)中ILP-2的表达,Western blot结果表明,与乳腺正常上皮细胞相比较,乳腺癌细胞中ILP-2有高表达,进一步表明ILP-2与乳腺癌MCF-7细胞生长关系密切。进一步采用干扰片段(siRNA-3、siRNA-5、siRNA-NC)敲低ILP-2的表达,应用MTT法、刻痕实验、AO-EB染色法分别检测3株乳腺癌细胞的生长活性、细胞的迁移及细胞的凋亡,分析ILP-2对MCF-7细胞生长的作用。结果显示在敲低ILP-2表达的乳腺癌细胞中,细胞存活率及细胞迁移率都低于对照组,而细胞的凋亡率增加。因此,说明ILP-2能够有效促进细胞生长活性,增加细胞的迁移并有效抑制细胞的凋亡。为寻找在乳腺癌MCF-7细胞中与ILP-2相互作用的蛋白质,采用免疫共沉淀(CO-IP)及质谱技术,探究与ILP-2相互作用的蛋白质。通过ILP-2抗体特异性,寻找与IgG对比明显的差异条带,进一步质谱技术鉴定,结果显示ILP-2与CHK2有相互作用,免疫共沉淀联合免疫印迹反向得以验证。本研究深入探讨ILP-2促进乳腺癌细胞生长的分子机制,免疫印迹实验结果显示敲低ILP-2表达的MCF-7细胞中,Csapase-3、CHK2、pCHK2表达升高,Cdc25C、pCdc25C表达降低。说明ILP-2对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响与CHK2调控的CHK2/Cdc25C信号通路有关。