【研究背景】双酚A(bisphenol A，BPA)属双酚类化合物，具有雌激素样作用，是一种环境雌激素。BPA作为塑料工业生产聚碳酸酯、环氧树脂、酚醛树脂等物质的前体物质，是一种广泛应用的化工原料，随着含BPA产品的广泛应用，BPA已造成了严重的环境污染。BPA可通过多种途径影响人体内分泌及代谢，导致代谢紊乱。大量研究表明，BPA不仅对心脑血管疾病、II型糖尿病及肥胖等疾病有影响，而且还对中枢神经系统，内分泌、生殖和免疫系统的发育有危害。基于BPA对人类健康的广泛危害，阐明BPA对人类健康的影响及其分子机制，进而开发出各种防制措施是当前的研究热点。以往研究表明，BPA不仅可引起雄性哺乳动物性腺发育不良、精子数量减少等，并对子代生育能力产生影响，而且还可引起雌性哺乳动物阴道、子宫、卵巢等生殖器官形态和功能的改变，与复杂性子宫内膜过度增生及流产等疾病的发生密切相关。稽留流产，又称过期流产，指孕20周前宫内胚胎或胎儿死亡后未及时排出者。目前，其病因尚不明确，已有实验研究表明，稽留流产与染色体数量异常有关，血清BPA浓度与复发性流产有关，但BPA与稽留流产的关系及其机制尚未明确，因此，本研究目的如下:【目的】1、通过探讨稽留流产患者血清中BPA水平与稽留流产的关系，同时检测稽留流产患者胚胎染色体改变，从而揭示环境雌激素BPA影响流产是否与染色体数目异常相关，为稽留流产的病因学研究提供新的思路。2、通过体外获取经BPA染毒处理的小鼠卵母细胞，对染色体核型进行分析，检测相关基因表达变化，并构建BPA染毒小鼠妊娠模型，体内验证BPA处理阶段对妊娠小鼠胚胎数量和质量及相关激素分泌和基因表达的影响，初步探究BPA导致流产的分子机制。【对象和方法】本课题共分三部分内容，第一部分为临床研究。选择2010年7月-2013年2月吉林大学第一医院产科门诊及住院的稽留流产的孕妇109例，并选取52例孕20周内因计划外妊娠要求人工流产或引产的正常妊娠孕妇作为对照，记录年龄、体重指数、职业等人口学指标和临床病理特点。采用高效液相色谱分析法检测血清BPA浓度。取流产患者的绒毛及胎儿组织，采用荧光原位杂交法检测染色体异常情况。第二部分为体外实验，给予ICR雌小鼠双酚A染毒处理后，收集卵母细胞，采用C带染色法分析染色体核型，通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞减数分裂相关基因表达变化，初步探讨BPA导致妊娠流产的分子机制。第三部分为体内研究，构建BPA染毒小鼠妊娠模型，分成BPA不同处理组，明确BPA对妊娠小鼠胚胎数量和质量的影响及其相关分子机制。【结果】1、本研究共收集109例稽留流产样本，其中11例样本因胎儿在宫内死亡时间过长或其他因素未能检测到细胞，视为无效样本。此外，收集了52例正常妊娠者作为对照组。稽留流产组与正常妊娠组患者的在年龄、体重指数、孕期、吸烟和饮酒情况、职业、受教育程度及民族等人口学指标上均衡可比，差异无统计学意义。血清BPA高效液相荧光色谱结果显示稽留流产组患者血清BPA浓度（3.381.01μg/L）明显高于正常妊娠者（1.450.52μg/L），两组间差异有统计学意义（P=0.001）。亚组分析结果提示，稽留流产患者中不同妊娠周期（P=0.768）和胚胎性别（P=0.853）者血清BPA水平无明显差异。但胚胎染色体异常者血清BPA水平明显高于染色体正常者，差异有统计学意义（P<0.001）。在调整了年龄、体重指数、职业、民族等方面因素后，随着血清BPA水平的升高，胚胎染色体异常的发生风险逐渐增加(趋势检验P<0.05)。FISH检测结果显示，98例患者中共21例出现染色体异常，单纯常染色体出现异常15例，单纯性染色体异常4例。性染色体异常XXY联合18号染色体三体异常1例，联合21号染色体单体异常1例。2、染色体C带染色法分析结果显示，BPA染毒14d的ICR雌鼠MII期卵母细胞染色体出现异常，主要表现为非整倍体。与对照组相比，BPA处理组小鼠MII期卵母细胞染色体异常的发生率显著升高。荧光定量PCR结果提示，BPA处理不同时间的小鼠卵母细胞减数分裂标志基因（Stra8和Nalp5)较对照组均显著提高，但调控染色体聚合（Smc1β）和联会（Sycp1）的基因表达在两组之间无显著差异。此外，BPA处理可显著上调卵母细胞双链DNA断裂和修复相关基因的表达(Spo11，Rpa，H2ax和Blm)，但Mlh1的表达无明显变化。3、妊娠前BPA灌胃（5mg/kg/d）处理14d可抑制妊娠期胚胎和子宫的发育，显著降低了胚胎数量，而妊娠期间BPA灌胃（5mg/kg/d）处理11d并不影响胚胎和子宫的发育。妊娠前BPA灌胃（5mg/kg/d）处理14d对妊娠期胚胎发育的抑制作用，可能是通过下调子宫中ERα、PR基因表达来实现的。【结论】1、稽留流产患者血清BPA浓度显著高于正常妊娠者，提示孕妇血清中BPA浓度升高与稽留流产密切相关。稽留流产患者中胚胎染色体数目异常者血清BPA浓度显著高于染色体正常者，提示BPA浓度升高与稽留流产的胚胎染色体数目异常密切相关。2、BPA染毒处理14d可以导致小鼠卵母细胞染色体核型发生异常改变，可能与其上调减数分裂过程中相关基因（Stra8、Nalp5、Spo11、Rpa、 H2ax和Blm)表达有关。3、妊娠前BPA染毒处理和妊娠前及妊娠期间连续染毒处理可以减少妊娠小鼠胚胎数量和重量，而妊娠期间BPA染毒并不影响胚胎数量和重量，推测BPA对卵母细胞发育可能产生不良影响。妊娠前BPA处理可降低子宫重量，子宫中ER、PR基因表达量下降，推测BPA可能通过影响ER、PR表达，从而影响雌孕激素对子宫的作用。而且，ER、PR表达下降进而影响胚胎着床亦不除外为自然流产的原因。