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先天性免疫(Innate immunity)是宿主抵御病毒入侵的第一道防线。在机体细胞中的模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR)辨识、传递含有病毒成分的病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),进而激活宿主天然免疫信号通路,以抵抗病原的侵入。环鸟苷-腺苷合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是1种新发现的重要DNA识别受体,通过和病毒DNA结合后催化ATP和GTP在细胞中生成环化二核苷酸c GAMP,然后cGAMP和干扰素刺激因子STING(Stimulator of interferon genes)相互作用,对TBK1(TANK1-binding kinasel)和TAK1(TGF-activated kinase1)进行招募,激活下游IRF3与NF-κB通路,从而激活抗病毒基因I型干扰素的转录与细胞炎症因子等的生成,这些细胞因子是宿主适应性免疫和抗病毒免疫的关键。伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是双链DNA病毒,其不同毒株编码的UL24病毒蛋白高度保守,但是UL24蛋白的功能至今尚不清楚。PRV感染后如何逃逸cGAS-STING信号通路是其成功感染宿主细胞的关键之一,系统地筛选PRV拮抗c GAS-STING信号通路的病毒蛋白,全面解析PRV逃逸宿主天然免疫及致病的分子机制,可望为更为有效的PRV疫苗设计和新型药物作用靶点提供有力的科学参考依据,该课题的探索对猪伪狂犬病的防治具有重要的作用。本研究首先构建PRV的各个表达质粒,通过双荧光素酶报告基因检测系统性筛选,发现UL24蛋白是PRV拮抗cGAS-STING信号通路的病毒编码蛋白之一,并进一步探索伪狂犬病病毒UL24参与病毒逃逸宿主的天然免疫反应的分子机制。本课题通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证PRV编码蛋白UL24具有拮抗cGAS-STING信号通路的能力,发现UL24能够显著抑制该信号通路的激活。同时,双荧光素酶报告基因检测系统结果表明,过表达UL24能够显著抑制TNF-α介导的NF-κB信号通路的激活,表明该蛋白参与病毒逃逸宿主抗病毒作用。通过构建UL24基因敲除病毒,证明UL24缺失的PRV毒株(HeN1-UL24-KO)感染的细胞NF-κB激活明显高于野生型病毒(HeN1)。过表达实验转染cGAS-STING信号通路的接头分子表明,cGAS-STING信号通路中NF-κB通路相关蛋白的表达能够被UL24蛋白所抑制,进一步证实在P65蛋白水平受到UL24蛋白的作用。此外,免疫共沉淀分析表明,UL24蛋白与P65蛋白存在相互作用。间接免疫荧光实验表明UL24能够降低P65蛋白的表达,并且我们进一步证明了UL24可以通过泛素-蛋白酶体途径显著降解P65蛋白。综上所述,本研究增加了我们对于PRV的认识,首次证明了在UL24蛋白的作用下,伪狂犬病病毒感染后能够抑制cGAS-STING介导的抗病毒天然免疫信号通路,参与逃逸宿主的抗病毒免疫反应。