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目的：构建促肝细胞再生因子1(phosphatase of regenerating liver1, PRL-1)基因短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)’慢病毒干扰载体,沉默舌鳞癌细胞Tca8113中PRL-1基因的表达,研究该基因沉默对Tca8113细胞体外迁移、侵袭能力的影响。方法：设计5条针对PRL-1基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列,均设计为短发夹状RNA,合成单链oligoDNA,退火为双链DNA,构建于慢病毒载体重组质粒中,PCR电泳及基因测序进行验证。转染293T细胞,提取总蛋白,并行Western Blot检测,根据PRL-1基因蛋白表达下调情况筛选最佳干扰序列,对含最佳shRNA干扰序列的重组质粒进行慢病毒包装,行滴度检测。shRNA’慢病毒干扰载体感染Tca8113细胞,根据荧光预估感染率,嘌呤霉素筛选建Tca8113稳定感染细胞株；RT-PCR对PRL-1基因mRNA表达下调情况进行检测。划痕实验、Transwell侵袭实验检测PRL-1基因沉默后舌鳞癌细胞Tca8113体外迁移、侵袭能力的变化。结果：PCR电泳及基因测序结果表明,设计的5组shRNA干扰序列已成功定向连接于慢病毒载体重组质粒中,Western Blot外源筛选出KD2(PRL-1-shRNA1)对PRL-1基因的蛋白表达沉默效率最佳,对载有KD2干扰片段的重组质粒进行慢病毒包装,提纯病毒液,测得病毒滴度为7×108TU/ml。 shRNA慢病毒干扰载体对舌鳞癌细胞Tca8113的感染率达90%以上,通过筛选、扩增培养,建立了舌鳞癌细胞Tca8113稳定感染细胞株。RT-PCR结果示：PRL-1基因在mRNA水平表达下调达64%(P<0.05)。PRL-1基因沉默后,划痕实验中,Tca8113细胞划痕愈合时间明显延长,细胞迁移能力降低；Transwell侵袭实验中,穿过小室人工基底膜的细胞数PRL-1基因沉默组(25.5+0.4)明显少于空病毒转染组(81.5±2.0)和空白对照组(88.5+2.3)(F=1092.970,P=0.000)。结论:成功构建了针对PRL-1基因的慢病毒干扰载体,为成功感染Tca8113细胞做好准备。建立了shRNA漫病毒干扰载体稳定感染的Tca8113细胞株,该细胞株中PRL-1基因的表达明显下调,为进一步研究PRL-1基因在舌癌的发生、发展中的作用及其机制打下基础。实验证实,特异性沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌鳞癌细胞Tca8113的体外迁移、侵袭能力。