【摘 要】
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玉米是我国重要的粮食作物,在其种子的长期储藏过程中经常会遇到极端高温、高湿等逆境的胁迫,这种现象被称为种子的老化。老化后的种子主要表现在种子活力下降及品质变劣,还
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玉米是我国重要的粮食作物,在其种子的长期储藏过程中经常会遇到极端高温、高湿等逆境的胁迫,这种现象被称为种子的老化。老化后的种子主要表现在种子活力下降及品质变劣,还可能影响种质资源的贮藏和利用。引发是提高种子活力的有效且实用的方法之一,又称渗透调节。研究证明,硫化氢(H2S)被认为是继NO、CO之后的第三种气体信号分子,在植物的生长发育方面起着重要作用。本研究利用郑单958玉米种子在高温高湿条件(42℃、100%相对湿度)下老化5天以模拟自然条件下发生的老化过程,然后用NaHS作为H2S供体引发处理。通过标准发芽实验、生理指标的测定、同工酶活性染色、体外抗氧化实验以及蛋白质组学等技术手段研究硫化氢供体对老化后玉米种子活力的影响,旨在明确NaHS作为引发剂对玉米种子活力进行修复的主要作用机理和效果。研究的主要结果如下:(1)随着老化程度的加剧,种子会逐渐丧失活力,并会伴随着细胞的膜结构完整性遭到破坏,最直观的综合性表现是种子发芽率降低。本研究结果表明,不同浓度的NaHS引发处理均能促进种子提前萌发,增强内部生理代谢,并显著地提高了老化玉米种子的发芽率,当NaHS浓度为100μmol/L时,引发效果最佳。(2)生理指标测定结果显示,老化胁迫造成玉米种胚活性氧自由基过量积累,膜脂过氧化程度明显,抗氧化酶活性降低。NaHS引发处理可有效地清除种胚中的活性氧,减少细胞膜脂过氧化程度,诱使胁迫条件下过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2·-)、和丙二醛(MDA)的含量减少,细胞内一些抗氧化酶如过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和非酶抗氧化剂如谷胱甘肽(GSH)含量增加,对种子活力的修复具有积极作用。(3)同工酶活性染色结果发现,老化胁迫后,玉米种胚代谢活动减弱,过氧化氢同工酶、过氧化物同工酶活力与正常种胚相比均有所下降,表现为同工酶电泳图谱的条带较暗、表达量低;NaHS引发处理重新激活种胚内生理代谢过程,同工酶的表达量又有所升高,表现为条带颜色变亮。(4)体外抗氧化实验结果表明,NaHS对过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子自由基(O2·-)等活性氧有很好的清除作用,能较好的反映出硫化氢气体信号分子的抗氧化性质。(5)本实验运用TCA/丙酮法提取正常、老化、NaHS引发后的种胚蛋白质。经PDQuest软件进行蛋白质组学的初步分析,共得出65个差异蛋白点,其中14个存在2倍以上显著差异,丰度变化较明显。根据差异表达蛋白点的丰度变化趋势,本研究中差异表达蛋白点可分为表达先上升后下降、表达先下降后上升和表达不明显三种类型。
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