【摘 要】
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自从2000年首次通过体细胞克隆技术(Somatic cell cloning)获得第一头克隆猪以来,体细胞克隆技术在基础研究和应用中均取得了丰硕的成果。仅在我国就已经有多家商业公司将体
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自从2000年首次通过体细胞克隆技术(Somatic cell cloning)获得第一头克隆猪以来,体细胞克隆技术在基础研究和应用中均取得了丰硕的成果。仅在我国就已经有多家商业公司将体细胞克隆技术应用于地方猪品种资源保护、良种的快速扩繁、农用育种材料创制、医用模型创制等多个领域,开创了前所未有的新型产业模式。但目前猪的体细胞克隆技术在应用中还存在一些技术难点,其中最主要的就是克隆胚胎发育效率较低,主要表现为克隆胚胎囊胚率低,极大的限制了猪体细胞克隆技术的应用和相关企业的发展。本文发展了2种提高猪体细胞克隆胚胎发育效率的方法:方法一是使用10 n M毛壳素预处理供核细胞24 h之后再进行体细胞克隆。与对照组相比,该方法能显著提高猪克隆胚胎的囊胚率(P<0.05);同时本文还对毛壳素处理后引起的表观遗传修饰进行了检测,发现使用10 n M毛壳素处理大白猪胎儿成纤维细胞(Pig embryonic fibroblasts,PEF)24 h后,能够降低组蛋白3第9位赖氨酸三甲基化(Histone 3 lysine 9 trimethylation,H3K9me3)修饰水平,提高组蛋白3第9位赖氨酸单甲基化(Histone 3 lysine 9 monomethylation,H3K9me)修饰水平。方法二是使用靶向组蛋白甲基转移酶SUV39H1/2(Suppressor of variegation 3-9 homolog l/2)基因的小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)连续2次转染PEF细胞后进行体细胞克隆,该方法同样能显著提高猪克隆胚胎的囊胚率(P<0.05)。本文从猪体细胞克隆技术实际应用中的瓶颈出发,发展了2种能够有效提高猪体细胞克隆胚胎发育效率的方法,对提高猪体细胞克隆效率,促进猪体细胞克隆技术的推广和应用,降低体细胞克隆相关企业的生产成本,增强相关企业竞争力具有重要意义。
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