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目的:构建人促甲状腺激素受体(hTSHR)真核表达载体pcDNA3.1/hTSHR,为构建甲状腺相关眼病的动物模型奠定基础。
方法:采用RT-PCR的方法从人正常甲状腺组织总RNA中扩增目的片段hTSHR,将纯化的扩增产物与表达载体pcDNA3.1(+)分别双酶切后连接,转化至E.coli DHt5α感受态菌中。得到的重组质粒经PCR、双酶切和核苷酸序列测定方法进行鉴定。
结果:PCR扩增得到hTSHR与预期大小一致、约2300bp的特异性DNA片段。该片段与表达载体pcDNA3.1(+)双酶切后连接得到重组质粒pcDNA3.1/hTSHR,经PCR、双酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR片段插入序列和方向正确。
结论:成功构建hTSHR真核表达载体pcDNA3.1/hTSHR,可用于后续基因表达。