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本试验采用光敏感型不同的津田芜菁和赤丸芜菁品种为试材。用黑暗和UV-A条件处理津田芜菁和赤丸芜菁块根,提取总RNA,利用Northern杂交技术检测花青素合成关键酶基因PAL、F3H、DFR、ANS和转录因子MYB、UV-A受体CRY2基因的表达特性,同时分析UV-A不同处理时间对津田芜菁块根皮中PAL、F3H、DFR、ANS、MYB、CRY2表达特性的影响。利用RACE技术对花青素合成关键基因F3H进行cDNA全长克隆。
主要研究结果如下:(1)本研究发现在光敏感型试材津田芜菁中,PAL、F3H、DFR、ANS基因的表达受UV-A诱导;而在光不敏感型试材赤丸芜菁中,只有PAL、F3H、ANS基因的表达受UV-A诱导。
(2)UV-A处理津田芜菁不同时间后,块根皮中花青素合成相关基因的表达结果显示:PAL、F3H、DFR、ANS基因的表达量与UV-A处理时间呈正相关关系,随着处理时间的延长基因的表达量逐渐增加。
(3)黑暗处理和UV-A处理不同时间,MYB和CRY2基因的表达量没有明显变化。
(4)花青素生物合成的关键酶基因F3HcDNA全长克隆的结果表明:基因全长为1170bp,包含一个完整的开放阅读框(openreadingframe,ORF)的序列。从碱基的序列比较结果看,已克隆的基因片段为F3H基因的cDNA碱基序列,从BLASTn与BLASTx的比较结果可推断其第10位开始的前3个碱基ATG为翻译的起始密码子,编码甲硫氨酸,1083位结束的后3个碱基TAG为翻译的终止密码子,而且起始密码子的上游有一段长9bp的5非编码区,在终止密码子下游还包含长84bp的3非编码区,表明RACE反应得到的cDNA全长序列比较完整。