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目的:检测甲基化抑制剂处理前后宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡改变,及HIC-1、HPV表达的变化,初步探讨去甲基化对宫颈癌中HIC-1基因及HPV表达的影响。方法:分别用不同浓度5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预细胞5d。提取细胞的RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HIC-1mRNA、P53mRNA、HPV18E6mRNA在干预后表达变化情况;用直接记数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法检测细胞生长曲线与细胞增殖实验。结果:(1)凝胶图像分析仪分析RT-PCR产物:实验组5-Aza-CdR(终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用Hela细胞5d前后,①各实验组和对照组HIC-1 mRNA/β-actin分别为0.486±0.025、0.548±0.014、0.864±0.032、0.927±0.031,随着5-Aza-CdR浓度的升高,其表达随之增加,经方差分析对照组和实验组之间差异具有显著性(F=701.430,P＜0.05)。②实验组和对照组P53 mRNA/β-actin分别为0.063±0.026、0.207±0.028、0.598±0.030、0.807±0.029。经方差分析多重比较结果显示试验组与对照组有显著性差异(F=446.673,P＜0.05)。③实验组和对照组HPV18E6mRNA/β-actin分别为0.405±0.022、0.373±0.021、0.377±0.015、0.408±0.012,各实验组和对照组数据之间差异无显著性(F=2.900,P＞0.05),即5-Aza-CdR干预前后,HPV18E6mRNA表达无明显改变。(2)经终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的5-Aza-CdR处理HeLa细胞5d后,MTT检测各实验组细胞活力分别为(A490值)65.08%±4.06%、49.68%±1.49%、38.80%±3.00%,与对照组(A490值)91.22%±2.7%,比较有明显差异(F=208.39 P＜0.05)。在所检测的浓度范围内随着5-Aza-CdR浓度的增加,对HeLa细胞作用随之增加,呈量一效关系(相关度比较R=-0.969 P＜0.05)。(3)5-Aza-CdR处理前后Hela细胞形态学出现以下改变:倒置显微镜下观察,对照组细胞生长良好,细胞伸展、透亮,呈不规则对角型,随时间推移,细胞逐渐增多,细胞接触紧密。实验组20μmol/L的5-Aza-CdR作用5d后Hela细胞细胞密度降低,汇合度约为对照组的70%,细胞形态未见明显改变。(见图1、2)结论:1.HIC-1基因甲基化是HIC-1基因表达下调的重要机制之一;2.HIC-1基因甲基化可能在宫颈癌Hela细胞增殖中发挥作用;3.5-Aza-CdR可抑制Hela细胞增殖,并在一定浓度范围内呈量效关系。