目的:研究Ad-TGFβ1感染BMSCs黏附3D打印PLA支架的软骨细胞分化性能,为BMSCs-PLA复合支架进行体内修复兔关节软骨缺损提供实验依据。方法:1、2月龄新西兰大白兔缺氧处死,从双后肢股骨、胫骨中分离出BMSCs培养,每2-3天观察其生长情况,直至培养至第三代细胞(P3)备用;2、Ad-TGFβ1扩增,检测扩增后Ad-TGFβ1滴度;取扩增后的Ad-TGFβ1感染BMSCs细胞,TGFβ1基因成功导入BMSCs细胞,同法用Ad-TGFβ1空载体导入BMSCs后备用。第7天时用荧光显微镜在观察绿色荧光细胞数量,计算空载组和感染组的感染效率。3、制作兔膝关节软骨缺损模型,进行膝关节CT扫描,收集软骨缺损原始数据,以PLA为打印材料设计支架孔径100μm,运用3D技术制作软骨缺损支架,用2mol/L Na OH溶液对PLA支架进行表面改性后。消毒备用。4、取18个PLA支架,随机将其中6个PLA支架和Ad-TGFβ1感染组BMSCs共培养,另随机6个PLA支架和空载组细胞共培养,剩余6个PLA支架和空白对照组BMSCs细胞共培养。每2-3天换液,细胞计数法测定各组细胞在PLA支架上的黏附率。5天后扫描电镜观察细胞黏附情况。CCK8检测各组细胞在PLA支架上的细胞活力。取各组支架细胞复合物进行成软骨诱导,7天后进行甲苯胺蓝染色检测软骨细胞分化效果,q PCR检测TGFβ1 m RNA的相对表达量,Western blot检测COL-Ⅱ表达量;用SPSS22.0软件进行数据统计分析,计量资料服从正态分布用均数±标准差(±s)表示,三组及三组以上使用方差分析,两两对比使用LSD检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、从兔骨髓组织中成功分离出BMSCs;2、构建的Ad-TGFβ1感染HEK293细胞后出现明显CEP现象,Ad-TGFβ1病毒滴度检测为5xl08PFU/m L。成功将扩增后的Ad-TGFβ1感染BMSCs,感染效率高达80%。3、采用3D打印技术制备出孔径大小100μm PLA软骨缺损支架。4、电镜扫描示各组PLA支架表面均有细胞黏附,见有线状突起伸展贴附于支架上,但BMSCs与PLA支架共培养各组细胞黏附率差异明显,转染组细胞黏附率最高组间比较有统计学意义(P<0.05)。各组支架细胞复合物成软骨诱导第7天进行TGFβ1m RNA的相对表达量检测,转染组TGFβ1m RNA的相对表达量为2.28±0.13,显著高于空白组和空载组,差异有统计学意义(P<0.05)。甲苯胺蓝染色感染组细胞核呈蓝紫色,空载组及空白组甲苯胺蓝染色阴性。电泳结果显示感染组条带染色深,COL-Ⅱ相对表达量为1.40±0.06,较空白组及空载组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、3D打印PLA支架表面改性处理后能够增强Ad-TGF?1感染BMSCs PLA支架黏附性能。2、Ad-TGF?1感染BMSCs黏附3D打印PLA支架能够诱导分化为软骨细胞。