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Smads蛋白家族是近年新发现的细胞内信号传导蛋白,在转化生长因子(transforming growth factor, TGF-β)超家族成员的信号转导通路中具有重要的作用。Smad4作为Smad蛋白家族重要成员之一,是哺乳类中发现的唯一一种Co-Smad,被认为是TGF-p各成员信号传递必需的中心转导分子。Smad4在TGF-β/Smad信号通路中发挥着关键作用,其表达缺失或者突变都会引起TGF-β/Smad信号转导紊乱,从而对机体组织或细胞产生重要影响。近年来研究发现小鼠卵巢中存在Smad4信号转导途径,TGF-β对卵泡的分化调节很有可能是通过Smad4信号途径实现。本文利用RNAi技术沉默Smad4基因,探讨其对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响。设计并合成靶向Smad4(?)勺小分子干扰RNA,在脂质体的介导下转染猪卵巢颗粒细胞,荧光定量PCR检测Smad4mRNA表达情况；MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测细胞活性；原位末端核苷酸标记法(TUNEL)及Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况；荧光定量PCR检测Bcl-2,Bax的mRNA表达水平。1Smad4-siRNA转染猪卵巢颗粒细胞及其效率检测根据猪Smad4基因序列设计小分子RNA,利用脂质体转染猪卵巢颗粒细胞。荧光定量PCR检测Smad4mRNA表达水平, Smad4-siRNA转染浓度为8pmoL,作用36h时,Smad4-siRNA抑制效果最好,siRNA实验组较空白对照组下降84%(p<0.01)。利用MTT比色法检测干扰后颗粒细胞活性,结果显示,siRNA实验组细胞活性(0.27)显著低于对照组(0.31)(p<0.05),说明Smad4-siRNA转染对卵巢颗粒细胞的增殖有明显的抑制作用,推测RNAi抑制Smad4基因表达可能引起猪卵巢颗粒细胞凋亡。2RNAi抑制Smad4表达对颗粒细胞凋亡的影响采用原位末端核苷酸标记法(TUNEL)和Annexin V/PI流式细胞仪进行细胞凋亡情况分析。结果显示,siRNA实验组较对照组凋亡细胞明显增多,Smad4基因表达被抑制后,细胞凋亡率(22.1%)显著高于对照组(17.0%)(p<0.05)。表明沉默Smad4基因可促进猪卵巢颗粒细胞凋亡。3RNAi抑制Smad4表达对Bcl-2和Bax的影响采用荧光定量PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2以及Bax在颗粒细胞中相对表达水平。结果显示,与空白组相比,siRNA实验组Bcl-2表达显著下调,降低79%(p<0.01)。结果进一步表明沉默Smad4基因可促进猪卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl-2表达有关。