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背景与目的:胃癌多药耐药(multidrug resistance,MDR)是胃癌化疗失败最主要的原因之一,但其分子机制仍然不太清楚。为了寻找新的胃癌耐药相关的蛋白质,我们前期采用蛋白质组学技术比较胃癌细胞株SGC7901与长春新碱诱导的多药耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR蛋白质组的差异,鉴定出24种差异表达的蛋白质,其中可溶性耐药相关性钙结合蛋白(soluable resistance-related calcium-binging protein,Sorcin)和热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在多药耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中表达明显上调。为此,本研究拟在原有工作基础上,探讨Sorcin、HSP27高表达与胃癌细胞多药耐药的关系,以明确Sorcin、HSP27在胃癌细胞多药耐药产生中的作用和机制,为阐明胃癌多药耐药发生机制提供新线索,为逆转胃癌多药耐药提供新的靶点。方法:(1)将Sorcin siRNA和对照siRNA分别转染SGC7901/VCR细胞,以及将pcDNA3.0/Sorcin表达质粒和空白质粒pcDNA3.0分别转染SGC7901细胞,采用Western blotting检测Sorcin在转染细胞中的表达,确定转染效果;(2)采用MTT和流式细胞仪分别检测长春新碱对Sorcin转染细胞增殖和凋亡的影响,分析Sorcin表达改变对胃癌细胞化疗敏感性的影响;(3)将HSP27反义寡核苷酸或错义寡核苷酸分别转染SGC7901/VCR,采用Western blotting和免疫细胞化学方法检测HSP27在转染细胞中的表达,确定转染效果;(4)采用MTT和Hoechest33258荧光染色分别检测长春新碱对HSP27转染细胞增殖和凋亡的影响,分析HSP27表达下调对胃癌细胞化疗敏感性的影响;(5)免疫共沉淀结合质谱技术分离、鉴定SGC7901/VCR细胞中HSP27的相互作用蛋白质,并采用免疫共沉淀和Western blotting对部分相互作用蛋白质进行验证,探讨HSP27在胃癌多药耐药产生中的可能机制。结果:(1)上调Sorcin表达明显降低SGC7901细胞对长春新碱的敏感性,即活细胞数增加、凋亡细胞数减少;而下调Sorcin表达明显增强SGC7901/VCR细胞对长春新碱的敏感性,即活细胞数减少、凋亡细胞数增加;(2)下调HSP27表达能明显增强SGC7901/VCR对长春新碱的化疗敏感性,即活细胞数减少、凋亡细胞数增加;(3)在SGC7901/VCR细胞中鉴定了25个HSP27的相互作用蛋白质。这些HSP27相互作用蛋白质按功能分为八类:细胞骨架蛋白质、分子伴侣、代谢相关酶类、信号传导相关蛋白质、核糖体蛋白、DAN修复相关蛋白质、转录和翻译相关蛋白质和RNA加工蛋白质,它们的功能与报道的HSP27功能相符合。结论:(1)Sorcin和HSP27蛋白高表达与胃癌细胞多药耐药形成有关,抑制Sorcin和HSP27高表达可逆转胃癌细胞的多药耐药性;(2)HSP27可能通过对相互作用蛋白功能的影响而参与胃癌的多药耐药。(3)研究结果为揭示胃癌的多药耐药性产生机制,以及寻找逆转胃癌多药耐药的新靶点提供了科学依据。