大鼠血管内皮细胞对大鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导的影响研究

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目的:体外分离和培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)和SD大鼠血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cells, VECs),并对两种细胞进行鉴定;探寻两种细胞在成脂诱导条件下共培养比例,研究大鼠血管内皮细胞对骨髓间充质干细胞成脂诱导的影响,为下一步两种细胞的三维共培养体系的建立提供一定的数据及理论支持。方法:本实验分为两个部分,第一部分为大鼠骨髓间充质干细胞和大鼠血管内皮细胞原代细胞的培养和鉴定,从6w的SD大鼠提取骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞,并对两种细胞进行鉴定,进行细胞扩增和冻存,为共培养提供细胞支持;第二部分实验分为三组,未诱导组为骨髓间充质干细胞不做任何诱导单独培养;单独诱导组为骨髓间充质干细胞单独成脂诱导培养;混合诱导组为血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞在共培养环境下成脂诱导培养,实验利用己培养出来的骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞确定共培养比例,分别比较单独诱导组和混合诱导组的骨髓间充质干细胞和对照组在成脂诱导时间及油红“O”染色的差异;使用异丙醇提取着色的油红“O”,利用酶标仪的520nnm波长的光检测其光学浓度(OD值)。使用SPSS20.0进行统计学分析,研究血管内皮细胞对骨髓间充质干细胞成脂诱导的影响。结果:1、成功由SD大鼠体内分离出骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞,并对细胞进行鉴定后,扩增及冻存备用;2、单独诱导组的骨髓间充质干细胞可见细胞内充满脂滴,油红染色呈阳性;混合诱导组的骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞在2:1共培养条件下进行成脂诱导时,观察不到脂肪样细胞的变化。单独诱导组的油红“O”吸光值在第7天时比未诱导组高(p<0.01),混合诱导组的油红“O”吸光值在第14天时比未诱导组降低(p<0.05)。结论:大鼠的骨髓间充质干细胞、血管内皮细胞被成功分离;血管内皮细胞抑制骨髓间充质干细胞的成脂分化。
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