【摘 要】
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[目的] 探讨nm23-H1基因转染对高转移人肺腺癌Anip973细胞株细胞分化、增殖和集落形成的影响。进一步研究nm23-H1基因对人高转移肺腺癌细胞表型逆转的作用,从而为后期nm23-H1
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[目的] 探讨nm23-H1基因转染对高转移人肺腺癌Anip973细胞株细胞分化、增殖和集落形成的影响。进一步研究nm23-H1基因对人高转移肺腺癌细胞表型逆转的作用,从而为后期nm23-H1基因用于口腔癌及其它肿瘤的基因治疗提供一定的理论和方法。 [方法] 首先利用已构建的含nm23-H1基因的重组腺病毒rhAd-nm23-H1,通过293细胞进行病毒扩增。将其转染高转移人肺腺癌Anip973细胞,然后进行免疫组化染色、免疫荧光实验及流式细胞术检测转染前后细胞内nm23-H1蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞体外增殖能力的变化;流式细胞术分析转染前后细胞周期及凋亡的改变;软琼脂集落形成实验观察转染前后肿瘤细胞集落形成的改变。 [结果] rhAd-nm23-H1经扩增后滴度可达107;当感染复数MOI=80时,其对Anip973细胞的转染率达80%以上。成功转染rhAd-nm23-H1的Anip973细胞nm23-H1基因的蛋白表达明显上升;转染rhAd-nm23-H1的Anip973细胞较对照组相比,G0/G1期、S期比例下降,G2/M期比例增高,凋亡率增加;体外增殖能力下降(P<0.05);集落形成率下降(P<0.05)。 [结论] 1.利用腺病毒载体介导nm23-H1基因转染人肺腺癌Anip973细胞后可明显提高细胞中nm23-H1蛋自的表达;2.nm23-H1基因转染人肺腺癌Anip973细胞后可明显抑制G2期细胞向M期过渡,同时促进癌细胞的凋亡;3.nm23-H1基因转染人肺腺癌Anip973细胞后能抑制体外肺腺癌细胞的增殖、集落形成能力。
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