目的:生物体衰老是一个复杂的、有各个器官和系统参与的数不清的一系列特定变化过程。衰老是指随着年龄的增长,在内外因素的作用下,发生在人体内分子、细胞、组织与器官中的一种不可避免、不可修复并且有害的改变,但是衰老又是人类生命进程中的必然发展规律,神经系统是受衰老影响较大的系统之一。目前,全球总人口达60多亿,人口老龄化的国家和地区数已增加到68个。预测到2025年全球人口将达到80亿,60岁以上老年人达8.5亿,届时全球都将步入老龄化社会。当脑组织出现衰老时,脑组织发生代谢产物的异常沉积,同时也出现病理性内含体及相应的临床表现,包括精神、感觉、认知、运动等障碍。衰老会诱导神经退行性疾病的发生发展,主要是由于表观遗传、分子生物学、基因突变等生物稳态体系的失稳态,导致老年痴呆。老年痴呆是继肿瘤、心脏病、脑血管疾病之后引起老年人死亡的第四大病因。老年痴呆的病因目前尚不明确,就目前的研究可以总结为三个方面。第一个,脑变性疾病,表现为大脑的萎缩,神经元纤维缠结,β-淀粉样蛋白的沉积,神经元数目减少,是目前认为诱导老年痴呆的主要病因。第二个,脑血管疾病,痴呆的发生与脑缺血、脑出血、脑梗死、脑栓塞疾病相关。第三个,遗传因素,关于遗传因素,目前学术界还是存在一定的争议,但是就临床研究结果显示,大约25%的痴呆患者,其后代患有老年痴呆的比例要比正常人高。内质网(Endoplasmic reticulum)是位于真核细胞中,参与蛋白质的合成,折叠和分泌的细胞器。内质网是维持细胞正常生理功能和储存钙离子的场所,其对细胞内环境的变化极其敏感。当细胞内环境发生改变时,内质网内未折叠或者错误折叠蛋白堆积以及钙离子失衡都会诱发内质网应激。内质网应激又会激活未折叠蛋白反应,这样会使内质网的分子伴侣被激活,从而启动降解系统来减少错误折叠蛋白或者是未折叠蛋白的堆积,进而缓解内质网应激。当过度而持久的内质网应激又会诱导细胞凋亡。补肾益智方是以广州中医药大学赖世隆教授为首的科研小组针对老年性痴呆的主要病理机制、总结长期临床经验并结合现代药理学研究成果设计而成,由蛇床子、枸杞子、人参、制首乌等中药组成。具有填精补髓,益气养血,活血通络,开窍的功效。前期的研究工作表明,该方对于痴呆具有一定的疗效。本研究以SAMP8鼠为动物模型,探讨补肾益智全方对痴呆的治疗作用及其机制的研究。方法:1.动物实验(1)补肾益智方改善SAMP8鼠认知障碍:7月龄雄性SAMP8鼠随机分为空白对照组(0.9%NaCl)、补肾益智低剂量组(1.46mg/kg)、补肾益智中剂量组(2.92mg/kg)、补肾益智高剂量组(5.84mg/kg),阳性药安理申组(3mg/kg/d)性别和年龄匹配的SAMR1鼠作为正常对照组(0.9%NaCl),每组20只,灌胃给药,每日1次,共2个月。采用Morris水迷宫、恐惧行为学实验检测小鼠的学习记忆功能。(2)补肾益智方对胆碱能神经系统的影响:胆碱能系统检测指标:乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AChE)。(3)补肾益智方抗凋亡作用:Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2、Pro-Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的表达水平,TUNEL染色看皮质内凋亡小体的分布。(4)补肾益智方缓解神经退行性病变:Western blotting检测突触相关蛋白PSD95、Synaptophysin、和神经生长营养因子NGF表达水平,尼氏染色看尼氏小体的情况。(5)补肾益智方对衰老相关蛋白SIRT1的作用:Western blotting检测衰老相关蛋白SIRT1的表达水平。(6)补肾益智方对内质网的影响:Western blotting检测内质网相关蛋白P-PERK,PERK,IRE-1α,P-IRE-1α,eIF-2α,p-eIF-2 α,BIP,PDI,CHOP 的表达情况。结果:1.补肾益智方明显改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,Morris水迷宫检测结果显示:和模型组比较,补肾益智方和安理申组小鼠逃避潜伏期缩短,找到的平台时间缩短,穿越平台次数和目标象限停留时间都增加,游泳速度存在差异。恐惧实验中,补肾益智方改善了由衰老所诱导的认知功能障碍,给药组的凝滞时间和凝滞次数都增加。2.补肾益智方改善了 SAMP8鼠胆碱能神经系统功能。3.补肾益智方提高了 SAMP8鼠的抗凋亡水平,促进细胞的生存。4.补肾益智方改善了 SAMP8鼠突触相关蛋白的表达水平,保护了神经元。5.补肾益智方激活了 SAMP8鼠SIRT1蛋白的表达水平。6.补肾益智方缓解了 SAMP8鼠脑内的内质网应激,抑制了凋亡。结论:补肾益智方可以改善痴呆小鼠的认知障碍,提高其学习和记忆的能力。保护胆碱能神经系统,抗凋亡,促进细胞的生存,保护神经元,激活了 SIRT1蛋白,缓解内质网应激,抑制凋亡。