非酒精性脂肪性肝病(non-alcohol fatty liver disease，NAFLD)是指除外过量酒精和其他具有明确因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征。根据病理变化分为三个阶段:单纯性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎(non alcoholic steatohepatitis，NASH)，脂肪性肝硬化（肝纤维化和肝硬化）。近几十年来，NAFLD发病率迅猛增加，有研究表明大量摄入富含高果糖的软饮料与NAFLD的发生有密切关系。资料表明NAFLD呈进展性，尤其在NASH阶段，患者有20％-50％发展为进展性肝纤维化，发展为肝硬化的风险为30％，5％会发展为肝癌。因此防治NAFLD已成为医学和社会普遍关注的热点问题。　　 目前较为公认的NAFLD发病机制是“二次打击”学说:“初次打击”为胰岛素抵抗;“第二次打击”以氧化应激为核心，引起已经脂肪变性的肝细胞进一步发生炎症、坏死，呈进展性肝纤维化。因此氧化应激是NAFLD发展恶化的关键。氧化应激状态下，脂质过氧化产物生成增加，多种细胞因子释放，如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)，白介素-1等，介导炎性反应，导致肝细胞发生炎症、坏死，肝脏出现纤维化反应。　　 机体通过抗氧化防御机制抑制自由基的过量生成以及修复细胞的氧化应激损伤。机体抗氧化防御体系主要由抗氧化酶类系统构成，包括:NAD(P)H醌氧化还原酶1(NAD(P)H: quinine oxidoreductase1，NQO1)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GPx)、过氧化氢酶(catalase，CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)以及血红素加氧酶(haeme oxygenase1，HO-1)等。这些抗氧化应激酶通过消除超氧阴离子自由基，维持晶体蛋白巯基的还原状态，减轻机体氧化应激状态，提高细胞稳定性，防止和纠正组织细胞氧化应激损伤。此外，非酶类抗氧化物谷胱甘肽(glutathione，GSH)在抗氧化应激方面也发挥重要作用。　　 核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)是近年来发现的细胞抗氧化还原的中枢调节者，具有诱导编码调控二相解毒酶基因和抗氧化酶基因的作用。在正常情况下，Nrf2位于胞浆中，与Keap1结合呈无活性状态，在自由基及氧化应激的刺激下，Nrf2与Keap1解离，转入胞核内，与抗氧化反应元件(antioxidant responsive element, ARE)结合，通过ARE的转录激活下游抗氧化酶发挥抗氧化损伤和抗炎作用。有研究表明，Nrf2的缺失明显加重了非酒精性脂肪肝的进程。　　 非酒精性脂肪性肝病属中医“胁痛”、“黄疸”等病范畴。多由过食肥甘厚味，湿热蕴藉中焦，湿热阻滞，病理机制主要在“湿”、“热”。苦参碱具有清热、利湿功效，可从多个环节和途径发挥抗肝损伤作用。苦参碱为中药苦参提取物，现代药理研究表明，苦参碱具有抗炎、免疫抑制、抗纤维化作用，临床广泛用于慢性肝损伤患者，因此，本课题组认为，苦参碱可能具有预防或逆转NAFLD病程的作用，并对其抗NAFLD的分子机制进行深入研究。　　 本研究通过高果糖饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病病模型;苦参碱干预4周和8周，采用HE染色、全自动生化分析、Western blot、RT-PCR、ELISA等实验技术检测大鼠血脂、胰岛素抵抗、肝脏转氨酶、以及NQO1、HO-1、GPx、SOD、CAT、Nrf2、NF-κB等指标的变化，探讨苦参碱治疗NAFLD的作用及其部分作用机制，为苦参碱治疗NAFLD提供实验依据。　　 第一部分高果糖饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病模型的建立与评价。　　 目的:通过高果糖饮食喂养成功建立具有代谢综合征背景的大鼠NAFLD模型，诱导大鼠胰岛素抵抗、高甘油三酯血症及肝组织脂质的沉积。随着高果糖喂养时间的延长，观察肝脏组织病理的进展及肝脏纤维化指标羟脯氨酸(hydroxyproline，HYP)、TGF-β和层粘连蛋白(laminin，LN)的变化。　　 方法:清洁级雄性健康Wistar大鼠36只，体重180-200克，全部购自河北医科大学实验动物中心，合格证号(1104100)，实验动物在河北省人民医院动物实验室饲养，每笼2-3只，自由进食、饮水，室温(22±1)℃左右，相对湿度40％-60％，每日12小时光照维持，昼夜循环。大鼠随机分为两组:正常对照组(STD)和高果糖组(HFD)，每组18只。正常对照组予以基础饲料，热量组成（碳水化合物65％，脂肪8％，蛋白质21％，其他6％），总热量为260kcal/100g;高果糖组予以高果糖饲料，即基础饲料中碳水化合物部分的50％用食品级结晶果糖代替，热量组成:碳水化合物65％（其中果糖含32.5％），其余与基础饲料相同。于高果糖喂养后的第4周末、第8周末和第12周末，两组按随机原则分别选取6只大鼠，测血压，然后禁食12小时过夜，用罗氏血糖仪采尾尖血测空腹血糖，称体重后麻醉，腹主动脉取血，然后迅速取出肝脏组织，剪取部分肝组织切成组织块迅速放-70℃液氮中保存。将冻存肝组织匀浆，检测TG及HYP含量;应用western blot和RT-PCR法检测肝脏组织TGF-β和LN蛋白表达及基因表达，部分肝左叶组织固定于4％多聚甲醛溶液中固定、石蜡包埋、制成4μm厚切片，HE染色观察肝脏病理组织学变化。收集的血标本3000r/min离心10min，取上清，-70℃冰箱保存待测血生化指标及瘦素、脂联素水平。　　 结果:　　 1、高果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的体重变化:与对照组比较，高果糖组大鼠在4周、8周体重明显升高(P＜0.01），12周时高果糖组体重较对照组降低(P＜0.05)，差异有统计学意义。　　 2、高果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的血压变化:与对照组相比较，高果糖组大鼠在4周血压较对照组上升，但差异未达到统计学意义(P＞0.05），8周和12周时血压明显高于对照组(P＜0.01)。　　 3、高果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的血浆生化指标的变化:与对照组比较，高果糖组大鼠血胆固醇和甘油三酯水平在4周、8周和12周时明显高于对照组(P＜0.05，P＜0.01)，差异有统计学意义;血浆ALT和AST水平在4周时两组间无差异，高果糖组在8周和12周时ALT和AST水平高于对照组(P＜0.01，P＜0.05);空腹血糖在4周时两组间无差异(P＞0.05），高果糖组在8周和12周时空腹血糖高于对照组(P＜0.01）;空腹胰岛素及HOMA-IR在4周、8周和12周时明显高于对照组(P＜0.01）。　　 4、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的血浆瘦素、脂联素水平的变化:血浆瘦素水平4周较对照组升高(P＜0.01），差异有统计学意义;8周和12周时升高更加明显（P＜0.01）;血浆脂联素水平在4周、8周和12周时明显低于对照组(P＜0.01）。　　 5、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织TG含量变化:与对照组比较，高果糖组大鼠肝组织的TG含量在4周、8周时和12周时明显高于对照组(P＜0.01)，差异有统计学意义;8周比4周升高略有增加(P＞0.05），12周较8周下降(P＜0.05)。　　 6、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织HYP含量:大鼠血浆HYP含量在高果糖喂养8周和12周时与正常对照组相比升高(P＜0.01)，差异有统计学意义(P＜0.01)。　　 7、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织TGF-β和LN的蛋白和mRNA表达:与对照组比较，高果糖喂养8周和12周时，TGF-β蛋白表达明显升高(P＜0.01），差异有统计学意义;肝组织LN蛋白水平与TGF-β变化趋势相同。　　 高果糖喂养8周时，TGF-β mRNA表达和正常对照组相比升高(P＜0.01），差异有统计学意义，12周时TGF-β mRNA表达升高更加明显;肝组织LN mRNA表达在各时间点与TGF-β mRNA表达变化趋势相同。　　 8、肝脏HE染色观察脂肪肝程度:光镜下观察肝脏，高果糖模型大鼠成模率达到100％，高果糖组大鼠在4周时肝组织切片可见肝细胞内脂滴沉积，形成单纯性脂肪肝;8周时肝细胞内脂滴沉积明显增加，可见肝细胞呈气球样变，同时可见炎性细胞浸润及灶性坏死形成NASH;12周时肝细胞炎性细胞大量浸润，肝小叶结构破坏，大量坏死组织形成，纤维组织增生。　　 结论:　　 1、高果糖饮食喂养可导致大鼠呈现代谢综合征的表现，出现了体重增加，血压升高，胰岛素抵抗和糖代谢异常，以及高血脂。随时间延长，上述变化更加显著。　　 2、高果糖饮食喂养可引起大鼠血浆瘦素水平升高，脂联素水平降低，而高瘦素血症和低脂联素血症是非酒精性脂肪肝的危险因素。　　 3、高果糖饮食喂养4周成功建立NAFLD大鼠模型，大鼠肝脏甘油三酯蓄积，随时间延长，其水平增加;随着脂肪沉积的加重，肝脏转氨酶水平逐渐升高，肝脏功能受损，且肝脏纤维化指标逐渐升高，病理表现逐渐加重，可见炎性细胞浸润、坏死组织，形成NASH。　　 第二部分苦参碱对高果糖饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病的治疗作用。　　 目的:通过观察苦参碱治疗后，高果糖喂养大鼠肝脏组织病理学改善，肝组织TGF-β和LN mRNA表达以及蛋白表达的变化，肝脏TG含量、血浆生化指标的改变及其他代谢组分的变化，明确苦参碱对NAFLD的保护作用。　　 方法:雄性健康Wistar大鼠72只，实验动物的管理同第一部分。分组:大鼠适应性喂养1周后随机分为两组:正常对照组（STD，18只）和高果糖模型组(HFD，54只)，分别予以基础饲料及高果糖饲料（组成同第一部分）。喂养4周后，两组分别随机抽取6只大鼠，麻醉后处死，留取肝组织HE染色，证实非酒精性脂肪性肝病动物模型成功建立。然后将高果糖喂养大鼠随机分为四组，分别为高果糖模型组（高果糖喂养，无苦参碱干预，HFD），低剂量组（高果糖喂养+苦参碱40mg/kg，L-MA），中剂量组（高果糖喂养+苦参碱80mg/kg，M-MAT），高剂量(高果糖喂养+苦参碱160mg/kg，H-MAT)。各组于苦参碱干预后的第4周末和第8周末按随机原则抽取大鼠各6只，麻醉后处死，标本留取及指标检测方法同第一部分。　　 结果:　　 1、苦参碱治疗后非酒精性脂肪性肝病模型大鼠体重的变化:与高果糖组比较，不同剂量苦参碱组对大鼠体重没有影响(P＞0.05），说明苦参碱的治疗作用不是通过减体重作用而产生。　　 2、苦参碱治疗后非酒精性脂肪性肝病模型大鼠血压的变化:不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周、8周后，与高果糖组比较，相同时间点的不同剂量苦参碱均能使大鼠升高的血压下降（低剂量P＜0.05;中、高剂量P＜0.01），中高剂量组与低剂量组相比有显著性差异(P＜0.05）;中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05);　　 3、高果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的血浆生化指标的变化:不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周后，与高果糖组比较，相同时间点的不同剂量苦参碱均能使高果糖诱导的大鼠升高的甘油三酯下降，低剂量组即可比高果糖组下降(P＜0.05），中高剂量组比高果糖组下降更为明显(P＜0.01)，低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01);中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05); ALT和AST水平变化趋势与上述变化相同，在空腹胰岛素水平及HOMA-IR也能观察到相同的变化趋势。中剂量组苦参碱治疗4周时与高果糖组相比TC下降，差异有统计学意义(P＜0.05）。治疗8周后，各剂量治疗组生化指标与高果糖组相比均有明显差异，除AST外，各指标在低剂量组即可有显著性差异(P＜0.01），中、高剂量组和高果糖组相比下降更为明显(P＜0.01);而AST在各剂量治疗组和高果糖组相比下降（P＜0.05）。　　 4、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的血浆瘦素、脂联素水平的变化:血浆瘦素在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01);不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周后，瘦素水平下降（P＜0.01），低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异（P＜0.05）;中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）;治疗8周瘦素水平比相同时间点高果糖组下降(P＜0.01），各治疗组间无差异。血浆脂联素水平于苦参碱治疗后，4周时较高果糖组明显升高(P＜0.05）;治疗8周，脂联素水平与相同时间点高果糖组相比升高（P＜0.01），低剂量组与中高剂量组之间无差异（P＞0.05）。　　 5、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织TG含量变化:肝组织的TG含量在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01);苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周后，肝脏TG含量呈剂量依赖性下降(P＜0.01），H-MAT比L-MAT下降更明显(P＜0.05）;治疗8周肝脏TG含量比相同时间点高果糖组下降(P＜0.01），低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.01);中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 6、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织HYP含量:肝组织的HYP含量在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01），苦参碱干预4周，大鼠肝组织HYP含量与高果糖组比较有明显下降(P＜0.05，P＜0.01);苦参碱干预8周，HYP含量与同时间点高果糖组比较有明显下降(P＜0.01)。　　 7、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织TGF-β和LN的蛋白表达:肝组织TGF-β的蛋白表达在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01)，苦参碱干预4周，大鼠肝组织TGF-β蛋白表达在低剂量组与高果糖组比较无差异(P＞0.05），中剂量组和高剂量组与高果糖组比较有差异(P＜0.01）;苦参碱干预8周，大鼠肝组织TGF-β蛋白表达在低剂量组与高果糖组比较无差异(P＞0.05），中剂量组和高剂量组与高果糖组比较有差异(P＜0.01，P＜0.05)。LN的蛋白表达:肝组织LN的蛋白表达在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01)，苦参碱治疗4周时，各治疗组与高果糖组相比明显下降(P＜0.01)，M-MAT组LN表达与L-MAT及H-MAT组比较有统计学差异(P＜0.05)。治疗8周后各治疗组与相同时间点的高果糖组相比具有和治疗4周相同的变化趋势。　　 8、非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织TGF-β和LN的mRNA表达:肝组织TGF-β mRNA表达在高果糖组较正常对照明显升高(P＜0.01），与高果糖组比较，苦参碱干预4周和8周，大鼠肝组织TGF-β mRNA表达与相同时间点高果糖组相比均呈剂量依赖性降低;肝组织LN mRNA表达呈相同的变化趋势。　　 9、肝脏HE染色观察脂肪肝程度:光镜下观察大鼠肝脏HE染色，高果糖组大鼠肝组织切片8周时（苦参碱治疗4周），肝细胞内脂滴沉积明显增加，可见肝细胞呈气球样变，同时可见炎性细胞浸润;苦参碱低剂量治疗组脂质沉积明显减轻，但仍可见灶性坏死，中剂量组可见炎性细胞浸润及脂质沉积均明显减轻，高剂量组改善更加明显。高果糖组大鼠肝HE切片12周时（苦参碱治疗8周），肝细胞呈气球样变，炎性细胞大量浸润，肝小叶结构破坏，大量坏死组织形成，纤维组织增生;苦参碱呈剂量依赖性减轻肝细胞坏死，减少炎细胞浸润和脂质沉积。　　 结论:　　 1、苦参碱治疗非酒精性脂肪性肝病大鼠，对体重没有影响，说明苦参碱的治疗作用不是通过减体重作用而产生。　　 2、苦参碱可改变高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠的血压、血脂和血浆胰岛素水平，改善高瘦素血症和提高血浆脂联素水平。　　 3、苦参碱干预可改善高果糖诱导的非酒精性脂肪性肝病肝脏转氨酶水平、减少肝脏甘油三酯沉积，在转录及翻译水平降低肝组织纤维化指标的表达。　　 4、苦参碱在组织病理学上减少高果糖引起的大鼠肝细胞内脂滴沉积，减少炎性细胞浸润，减轻灶性坏死及纤维组织增生。　　 第三部分苦参碱对高果糖饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病氧化应激的影响。　　 目的:通过观察高果糖喂养大鼠肝组织中脂质过氧化产物丙二醛的含量变化，非酶抗氧化物谷胱甘肽和抗氧化酶过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性， CAT、SOD、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达，探讨氧化应激在高果糖导致NAFLD进展中的作用。通过苦参碱干预后上述指标的变化，探讨其肝保护作用机制。　　 方法:动物分组及肝组织标本取得同第二部分。肝组织MDA、GSH含量和CAT、SOD、GPx活性检测均严格按试剂盒说明书操作，应用western blot方法分析CAT、SOD、NQO1和HO-1在肝组织蛋白表达。　　 结果:　　 1、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏MDA含量的变化:肝脏MDA含量在高果糖组比正常对照组明显升高(P＜0.01);与高果糖组比较，苦参碱干预4周，肝组织MDA含量呈剂量依赖性降低(P＜0.01)，低剂量组与中高剂量组比有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01);治疗8周时，各治疗组与高果糖组比较均明显降低(P＜0.01），各治疗组之间无差异(P＞0.05）。　　 2、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏GSH含量的变化:肝脏GSH含量在高果糖组比正常对照组明显降低(P＜0.01）;不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周、8周后GSH含量比相同时间点高果糖组升高(P＜0.01）。4周时，低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01);中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。8周时，各治疗组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 3、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织CAT活性的变化:肝脏CAT活性在高果糖组比正常对照组明显降低(P＜0.01);40mg苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周CAT活性比相同时间点高果糖组增加87.7％(P＜0.01）;各剂量组之间无显著性差异(P＞0.05)。苦参碱治疗8周，与高果糖组相比，低剂量治疗组肝脏内CAT活性增加187％(P＜0.01)，各剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 4、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SOD活性的变化:肝脏SOD活性在高果糖组比正常对照组明显降低(P＜0.01);40mg苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周SOD活性比相同时间点高果糖组增加96.9％(P＜0.01）;各剂量组之间无显著性差异（P＞0.05）。苦参碱治疗8周，与高果糖组相比，低剂量治疗组肝脏内SOD活性增加193％(P＜0.01)，各剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 5、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织GPx活性的变化:肝脏GPx活性在高果糖组比正常对照组明显降低(P＜0.01);40mg苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝模型大鼠4周GPx活性比相同时间点高果糖组增加51.7％(P＜0.01)，中高剂量组增加更为明显，与低剂量组相比有差异(P＜0.05，P＜0.01);苦参碱治疗8周，与高果糖组相比，低剂量治疗组肝脏内GPx活性增加78.7％(P＜0.01)，各剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 6、苦参碱治疗的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织抗氧化酶蛋白表达(CAT、SOD、HO-1、NQO1)的变化:肝脏CAT、SOD、HO-1、NQO1蛋白表达在高果糖组比正常对照组升高(P＜0.01）;不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周后，上述各指标蛋白表达比相同时间点高果糖组进一步升高(P＜0.01)，低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.01)。　　 不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠8周后，上述各指标蛋白表达呈现不均一性。CAT和SOD的中高剂量组比低剂量组作用更强（P＜0.01），中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05); HO-1的低、中剂量组之间无显著性差异（P＞0.05），高剂量组比中、低剂量组作用更强(P＜0.05); NQO1各剂量组之间无显著性差异。　　 结论:　　 1、高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏MDA明显增加，提示肝内脂质过氧化的增强，肝内氧化应激的增加;苦参碱干预后肝内MDA含量明显下降，提示苦参碱能够改善脂质过氧化。　　 2、高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏GSH含量明显下降，且随着喂养时间的延长，降低更加明显，提示肝内非酶抗氧化能力的下降;苦参碱干预后肝内GSH含量明显增加，提示苦参碱能够改善肝内非酶抗氧化能力。　　 3、高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏CAT、SOD和GPx活性明显下降，且随着喂养时间的延长，降低更加明显，提示肝内酶类抗氧化能力的下降;苦参碱干预后肝内CAT、SOD和GPx活性增加，提示苦参碱能够改善肝内酶类抗氧化能力。　　 4、高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏CAT、SOD、HO-1和NQO1蛋白表达水平增加，提示机体对于氧化应激存在适应性调节;苦参碱干预后进一步增加上述抗氧化酶蛋白表达，提示苦参碱能够在翻译水平提高肝脏抗氧化能力。　　 第四部分苦参碱对高果糖饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病Nrf2抗氧化应激通路的影响。　　 目的:通过观察高果糖喂养大鼠肝组织中核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、NF-κB及血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化，探讨Nrf2在高果糖喂养致大鼠NAFLD中的作用，并观察苦参碱干预后上述指标的变化，探讨Nrf2在苦参碱肝保护中的作用。　　 方法:动物模型的建立、分组及肝组织标本取得与第二部分相同。分别制备肝细胞总蛋白和核蛋白。应用Western blot法分析肝细胞总Nrf2和核内Nrf2、肝细胞总NF-κB和核内NF-κB的蛋白表达，检测血浆TNF-α水平。　　 结果:　　 1、苦参碱对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏Nrf2蛋白表达的作用:肝脏总Nrf2蛋白表达在对照组、高果糖组和不同剂量治疗组间无差异(P＞0.05）。肝脏核内Nrf2蛋白表达在高果糖组较对照组升高(P＜0.01），不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周和8周后，核内Nrf2蛋白表达比相同时间点高果糖组进一步升高(P＜0.01)，低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.01);中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05)。　　 2、苦参碱对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏NF-κB蛋白表达的作用:肝脏总NF-κB蛋白表达在对照组、高果糖组和不同剂量治疗组间无差异(P＞0.05）。肝脏核内NF-κB蛋白表达在高果糖组较对照组明显升高(P＜0.01），不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周和8周后，核内NF-κB蛋白表达比相同时间点高果糖组明显降低(P＜0.01)，低剂量组与中高剂量组之间有显著性差异(P＜0.01）;中、高剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 3、苦参碱对非酒精性脂肪性肝病大鼠血浆TNF-α水平的作用:高果糖组血浆TNF-α水平较对照组明显升高(P＜0.01)，不同剂量的苦参碱作用于非酒精性脂肪性肝病模型大鼠4周、8周后血浆TNF-α水平比相同时间点高果糖组明显降低(P＜0.01），各剂量组之间无显著性差异(P＞0.05）。　　 结论:　　 1、高果糖诱导的NAFLD大鼠肝细胞核内Nrf2较对照组增加，提示机体对长期高果糖喂养氧化应激的慢性适应性调节;不同剂量的苦参碱作用下Nrf2蛋白表达进一步升高，提示苦参碱的肝保护作用与激活Nrf2通路增加下游抗氧化酶的表达有关。　　 2、高果糖诱导的NAFLD大鼠肝细胞核内NF-κB蛋白表达较对照组增加，血浆TNF-α水平也相应增加，提示高果糖喂养可引起肝脏慢性炎症;不同剂量的苦参碱作用下核内NF-κB蛋白表达明显降低，血浆TNF-α水平也相应下降，提示苦参碱下调NF-κB活性的抗炎作用与其肝脏保护作用有关。