西施舌精子超低温保存研究

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由于环境污染、无节制捕捞等原因,西施舌的种群数量正在急剧下降,雌雄亲贝不同步成熟或存在地域间隔也给育种等工作带来了许多困难,而西施舌精子冷冻保存研究可以很好地解决以上问题。本文探讨了西施舌精子超低温保存的影响因子,以期建立西施舌精子超低温保存的技术,为西施舌的种质资源保护以及相关实验研究提供技术支持。本次实验分别采用自然海水和人工海水为基础溶液,使用不同的抗冻剂、冷冻速率、平衡时间、解冻速率、水浴温度和时间、保存体积、保存时间,对西施舌精子存活率、受精率和孵化率进行了研究。结果表明,西施舌精子以自然海水为基础溶液,添加10%的DMSO配制成抗冻稀释液,稀释西施舌精子,不经降温平衡,距离液氮表面25 cm、15 cm、5 cm各停留6 min,移入液氮进行保存;解冻时,距离液氮表面5 cm、15 cm、25 cm各停留4 min,35℃水浴解冻后的保存效果最佳,精子的存活率达到73.4%,用以上保存后的精子作人工授精,测得精子的受精率为42.0%、孵化率为33.1%。以人工海水为基础溶液作对照,保存效果与自然海水相近。离体精子存活率在3.5小时内下降缓慢,6.5小时后下降至37.5%,10.5小时全部死亡。精子在添加10%DMSO保存在-10℃~-30℃下,不能存活。
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