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钙离子信号系统在调控真菌的各种生理过程方面具有关键作用,曲霉属也不例外。在构巢曲霉Ca2+/CaM/Calcineurin/CrzA钙离子信号通路中,Calcineurin发挥着中心调节者的作用,因此细胞中必然存在着多种与其相关的蛋白质,从而共同完成对细胞生理过程的调控。目前,已经报道的 Calcineurin 的转录因子有 Crzl(Calcineurin-Responsive Zine finger)、NFAT(Nuclear Factor of Activated T-cells)等。构巢曲霉中,分子机制研究较为清晰的是转录因子CrzA,已有实验表明,Δ CnaA菌株的表型比Δ CrzA的菌落表型更为病态,这意味着仍存在潜在的下游蛋白与Calcineurin相关。为此,找出参与Calcineurin调节的钙信号通路中新的蛋白,有助于更为深入地了解丝状真菌钙信号通路参与逆境胁迫响应的分子机制。通过文献的查阅进行了筛选,确定研究基因salA(the Suppressor of aac2 deletion Lethality gene)、vnxA(Vacuolar Na+/H+ eXchanger)在构巢曲霉中的功能发挥。利用基因同源重组的原理构建了ΔsalA和Δ vnxA菌株并结合固体平板培养法进行了相关表型的测试。结果发现,在含有EGTA造成的胞外低钙条件下,两种缺失菌与对照组相比均未表现出明显的差别;此种现象同样发生在金属离子的逆境测试中。此外发现Δ salA菌株对唑类药物ITr有微弱的抗性。Δ vnxA菌株对细胞壁破坏试剂Calcofluour White、Congo Red有微弱抗性;对唑类药物ITZ有轻微敏感性。salA与vnxA在构巢曲霉中没有表现出在钙离子信号系统中的功能,这一点与在酵母等真菌呈现出一定差异,不具种间保守性。另一方面,通过将库蚊属Culex quinquefasciatus的NFAT蛋白在构巢曲霉数据库中进行同源比对,得到可能的同源蛋白 AkrA(Ankyrin repeat-containing protein,Palmitoyl transferase involved in protein palmitoylation)、FapA(Protein that binds to Fprlp)、CdaA(Chitin deacetylase),重点研究基因akrA的功能。在低钙环境下,Δ akrA菌株在菌丝生长和产孢方面极其病态,而这种缺陷可以通过外源钙离子的添加而得到恢复。此外,发现ΔakrA菌株对Na+、K+、Mg2+和Li+具有敏感性;对细胞壁破坏试剂CFW和CongoRed的微弱耐受性。利用E-test条法测定Δ akrA菌株对抗真菌唑类药物ITZ的敏感性。另外,根据GFP技术,确定Akr蛋白可能定位于细胞内的高尔基体上。为了进一步研究akrA与钙信号系统成员的关系,本文又通过遗传学方法得到了ΔakrA/ΔcnaA,ΔakrA/ΔmidA,ΔakrA/ΔcchA,ΔakrA/OE::cchA菌株。ΔakrA/ΔcnaA菌株在基本培养基中表型比两种单缺菌表现的更为病态;在应对细胞壁破坏试剂逆境时,表型介于单缺菌株Δ akrA、Δ cnaA两者之间。Δ akrA 与Δ midA,Δ cchA菌株具有相似的低钙敏感表型,在低钙条件下,ΔarkA/ΔmidA,Δ akrA/Δ cchA菌株中表型更为敏感,可见AkrA功能的发挥和MidA/CchA复合体有相似之处。但在ΔakrA/OE::cchA菌株中,高调基因cchA时并未恢复双缺ΔakrA/ΔcchA菌株的表型缺陷,由此又说明AkrA和MidA/CchA复合体之间在某种层面上又是相互独立工作的。为了进一步找出akrA基因如何参与到钙信号系统中去,我们通过Aequorin法来测定外钙刺激下胞内钙离子的瞬时响应情况来进行分析。结果得出,akrA基因可能是通过影响胞外钙离子的流入来参与到构巢曲霉钙信号通路中去的。本文通过遗传学和细胞生物学的方法,结果发现ΔsalAΔ vnxA没有表现出可以检测到的缺失表型,说明在构巢曲霉中没有表现出在钙离子信号系统中的功能,这一点与在酵母等真菌中的呈现有一定差异,不具种间保守性。Akr蛋白定位于高尔基体,在构巢曲霉钙信号系统、离子稳态、耐唑类药物分子机制方面均有重要的作用。