目的 霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma, HL）以它独特的形态结构区别于非霍奇金淋巴瘤（non Hodgkin’s lymphoma, NHL）—散在、孤立的肿瘤细胞（H/RS细胞）“鹤立鸡群”地位于百倍甚至千倍于其的反应性周围背景细胞中，一百六十多年来吸引了大量的医学工作者对其实质进行研究。目前研究焦点主要集中在：（1）H/RS细胞究竟来源于何种细胞？（2）H/RS细胞与背景细胞有什么关系？本文基于上述疑点，创新性地采用石蜡切片单细胞基因分析技术结合IgH及TCRβ基因重排检测、间接法原位PCR，从H/RS细胞及其背景淋巴细胞的基因克降性入手，从一个新视角展开对cHL的肿瘤克隆性的研究，即H/RS细胞到底来源于何种淋巴细胞？周围背景细胞中是否有与H/RS细胞同克隆的细胞？ 实验设计 免疫球蛋白重链或T细胞受体基因有多样性，每一个成熟发展的淋巴细胞都有其特有的IgH或TCR基因编码，即免疫球蛋白基因和T细胞受体基因重排具有多样性，如果是肿瘤性组织，肿瘤细胞应该具有单一克降性，所以通过检测IgH及TCR基因重排，就可以判断淋巴组织疾病的来源和肿瘤性，我们通过检测H/RS及其背景淋巴细胞中有无相同克隆性基因重排来验证这个疑问：（1）首先我们结合HE，按WHO新分类，对32例cHL进行CD15、CD30、CD20、CD45RO和EBV蛋白检测以明确诊断和分型；（2）然后对32例cHL石蜡包埋组织进行IgH和TCRβ基因重排PCR检测；（3）对于IgH基因克隆性单带，利用PCR产物自行合成地高辛标记探针，对2例MCHL石蜡切片进行间接法原位PCR检测；（4）考虑到产物探针可能存在的干扰，接着我们利用显微操作仪，在石蜡切片上进行了H/RS单细胞挑取，半巢式PCR扩增，产物进行纯化、质粒载体上克隆、测序，为最终实现设计特异寡核苷酸探针进行间接法原位PCR奠定基础。 结果 （1）32例cHL，其中LrHL11例，NSHL2例，MCHL14例，LDHL5例；（2）H/RS细胞25/32（78.1％）CD15阳性，30/32（93.8％）CD30阳性，6/32（18.8％）CD20阳性，7/32（21.9％）CD45RO阳性，20/32（62.5％）例EBV阳性；（3）PCR检测，10/32（31.3％）检测到IgH基 因重排克隆性单带，3／32（9．1％）检测到TCR6基因重排克隆性单带，其 I 中一例为双克隆性重排；（4）建立了石蜡切片问接法原位 PCR，发现着 l 色微粒不仅位于H／RS细胞核内，也可见于周围背景淋巴细胞核内；（5）D 建立了石蜡切片单细胞基因分析技术，获得了克隆性单带及其PCR产物7 的序列结果。D 结论卜述工作初步显示：（）｝IE结合5种免疫标记基本可以明确cHL D 的诊断和分类；门）通过对lgH基因重排P＊R检测，可以初步确定部分 CIJL的B细胞来源：3例TCR6基回克隆性重排的检出，为CHL 的T细、D 胞来源提供了一定的启示：（）使用1咖基因P＊R产物探针进行间接法 原位 PCR，提示部分背景 B淋巴细胞与 H／RS细胞有同源性，但有待于设 l 计特异性寡核昔酸探针检测进一步证实；（4）石蜡切片挑取I4／RS单细胞D 进行基回分析是可行的。