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目的:重症肌无力(MG)是一种自身免疫性疾病(AID),目前治疗MG的主要而有效的措施仍然是糖皮质激素(GC)治疗。很多研究发现GC对AID的疗效好坏与糖皮质激素受体(GR)有关,而热休克蛋白90(HSP90)是GR的重要伴侣蛋白,所以外源性GC在体内是通过那些途径和方式发挥其药理作用的呢?尤其是它与GR、HSP90等关系及相互作用又如何呢?本研究拟通过检测MG患儿在使用GC干预前后血清皮质醇、PBMC中GRα、GRβ、HSP90α、HSP90β变化情况,并与正常儿童相比较,了解它们之间相互关系,探讨和推测GC在儿童MG治疗中的作用机制及临床使用价值。方法:1.收集MG患儿临床病史资料并进行分析。2.采集和检测血液标本:(1)PBMC分离及提取:用人淋巴细胞分离液分离观察组1(GC治疗前组)、观察组2(GC治疗后组)、正常对照组PBMC:一部分细胞用于RT-PCR试验;另一部分细胞滴片后用于免疫细胞化学(ICC)试验;分离的上清用于测定皮质醇。(2)化学发光法:用化学发光法测定正常对照组、GC治疗前、后组血清皮质醇水平。(3)免疫细胞化学法:用免疫细胞化学法观察三组PBMC中GRα、β和HSP90α、β表达情况。(4)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法:用逆转录聚合酶链反应法检测三组PBMC中GRα、β和HSP90α、β的mRNA表达水平。结果:1.观察组1血清皮质醇明显高于观察组2、正常对照组,差异有显著性(P<0.05);而观察组2与正常对照组相比,差别无显著性(P>0.05)。2.各组PBMC中GRα、β及HSP90α、β免疫细胞化学结果显示:观察组1-2表达均高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);而观察组1-2之间PBMC中GRα、β及HSP90α表达没有明显差别(P>0.05); HSP90β在观察组2明显高于观察组1,差异有显著性(P<0.05)。3.三组PBMC中GRα、β及HSP90α、βmRNA表达水平RT-PCR结果显示:观察组1-2表达均高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);而观察组1-2之间PBMC中GRα、β及HSP90α、β表达没有明显差别(P>0.05); HSP90β在观察组2明显高于观察组1,差异有显著性(P<0.05);RT-PCR结果与免疫细胞化学相同。4. PBMC中GRα、β在正常对照组胞浆、胞核都有微量表达;在观察组1分别主要表达于细胞浆、细胞核,在观察组2分别主要表达于细胞核、细胞浆。PBMC中HSP90α、β在正常对照组胞核有微量表达;在观察组1分别主要表达于细胞浆、细胞核,在观察组2两者都主要表达于细胞核。5.三组PBMC中HSP90β随着GRβ增高而增高;MG患儿在GC治疗前后HSP90α随着HSP90β增高而增高,有相关性(P<0.05)。结论:1.MG患儿血清皮质醇虽然在正常范围,但仍高于正常儿童,且在使用GC干预前后有明显差异(P<0.01),表明MG患儿可能存在GC转运及利用障碍;2.观察组1-2PBMC中GRα、β与HSP90α、β表达量及区域与正常儿童比较均存在较明显的差异,从而使HSP90β与GRβ结合异常增加,导致GRβ对GRα结合GC能力的抑制作用增强,也使HSP90β对GRα结合、转运及利用GC的协同作用减弱;3.给予外源性GC干预治疗后,由于纠正了机体异常的应激状态和免疫反应,虽然PBMC中GRα、β与HSP90α、β表达量没有发生明显降低,甚至有的进一步升高,但由于表达区域发生改变,使GRβ对GRα结合GC的抑制作用减弱,HSP90β协助GRα结合、转运GC的能力增强,因而使GRα结合、转运GC的能力提高,从而促进和增强GC的生理和药理作用的发挥,故不仅使患儿血清皮质醇明显下降,也使其临床症状得以改善。