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目的:检测USP18在肝癌细胞中的表达及对其生物学活性(细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡)的影响。方法:1、通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹(Western Blot)技术从肝癌细胞株HepG2、SMMC7721、Huh7,HepG2.2.15和Hep3B中筛选USP18基因高表达细胞株。2、设计并化学合成针对USP18的3对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用阳离子脂质体法瞬间转染。筛选出高表达细胞株后,采用离体培养该高表达USP18肝癌细胞,并设Nomal Control组、Negative Control组及USP18-siRNA-1、USP18-siRNA-2、USP18-siRNA-3各转染组。3、通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)法检测转染后各组细胞中USP18在mRNA和蛋白水平表达的变化,明确处理后USP18沉默的效果。4、通过MTT比色法描绘生长曲线和平板克隆形成实验检测转染后各组细胞增殖能力的变化。5、运用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期分布。结果:1、RT-PCR及Western blot结果显示:五种肝癌细胞株中,USP18基因均有表达,HBV阳性肝癌细胞中的表达高于HBV阴性肝癌细胞,其中Hep3B细胞表达最高,其次为HepG2.2.15、Huh7、SMMC7721,在HepG2细胞中表达最低。选择USP18表达最高的Hep3B细胞进行后续实验。2、Hep3B细胞转染USP18 siRNA 24 h后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况,随机取10个低倍视野,计数带有荧光蛋白的细胞占转染细胞总数的百分比来评价转染效率。结果显示转染效率达91±5.67%。3、3个特异性USP18-siRNA转染组转染48小时后,其USP18的mRNA和蛋白表达与另外2组比较受到明显抑制,结果显示转染干扰组USP18-siRNA-1抑制效果最明显(P<0.05),而阴性对照组与正常组相比差异无显著性(p>0.05)。4、MTT比色法描绘生长曲线及平板克隆形成实验显示,转染干扰组与正常组及阴性对照组相比,细胞增殖速度明显减慢(p<0.05),而阴性对照组与正常组相比差异无显著性(p>0.05)。5、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:转染干扰组与正常组及阴性对照组相比,细胞凋亡率明显增加(p<0.05),而阴性对照组与正常组相比差异无显著性(p>0.05)。6、流式细胞术检测细胞周期实验显示,转染干扰组与正常组及阴性对照组相比,细胞周期分布差异有统计学差异(p<0.05),出现G1期阻滞,S-G2期细胞显著减少。而阴性对照组与正常组相比差异无显著性(p>0.05)。结论:1、HepG2、SMMC7721、Huh-7,HepG2.2.15和Hep3B细胞中,Hep3B为USP18基因最高表达细胞株。2、siRNA干扰介导USP18基因沉默后,可抑制人肝癌Hep3B细胞的生长、增殖,促进细胞凋亡,并阻滞细胞周期于G1期。