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随着生活水平的日益提高,人们对于食品安全的要求也越来越高,大多数人会选择绿色有机的健康食品。2020年随着国家“禁抗令”的出台,在畜禽生产中寻找无毒无害、无残留的饲料添加剂就显得尤为重要。而黄腐酸作为一类绿色无残留的添加剂,添加于饲粮中可以提高鸡群免疫力,降低鸡舍氨排放量,改善鸡舍环境,降低料蛋比与料肉比,还可避免抗生素残留给人类健康造成的诸多危害。将黄腐酸应用于畜牧业中,可为无抗养殖提供更多现实依据。本试验选用450只42周龄京红1号蛋鸡父母代作为试验材料,分为五个组,每组90只,在饲粮中添加不同浓度的黄腐酸,其中A组为对照组,B组0.025%,C组0.05%,D组0.1%,E组0.2%。试验共计10周,每天记录不同组别的产蛋情况及健康状况,在试验期第1、4、7、10周最后一天每组分别禁食采血30只,并分离血清;每组收集鸡蛋50枚,用于蛋品质的测定;试验结束时,每组屠宰15只,采集肝脏、脾脏组织以及盲肠内容物样本,采用HE染色的方法进行肝脏、脾脏样本石蜡切片的制作,分析不同剂量黄腐酸对蛋鸡肝脏、脾脏组织形态学的影响;用ELISA法测定各时间点血清中IL-2、TLR-2、IgA、IgG、IgM、IgY等免疫指标含量;通过16S r RNA测序分析各组盲肠内容物微生物多样性。研究结果如下:1.生产性能分析结果处理组平均蛋重显著高于A组（对照组）（P<0.05）,A组为62.69g;B组（0.025%）和E组（0.2%）产蛋率显著低于A组、C组（0.05%）和D组（0.1%）（P<0.05）;C组鸡蛋合格率显著低于A、B、E三组（P<0.05）;C和E两组采食量显著低于A组,C组料蛋比最低,显著低于A组,为1.37（P<0.05）。2.蛋品质分析结果在43周龄时,E组蛋黄颜色显著高于其余四组（P<0.05）;A、B两组蛋黄重显著低于D组（P<0.05）。在46周龄时,A、B两组蛋形指数显著低于C、D、E三组（P<0.05）;B、C两组蛋壳厚度显著低于A组（P<0.05）;C组蛋黄颜色数值最高,D组最低;E组蛋壳重显著高于C、D两组（P<0.05）。在49周龄时,B组蛋形指数显著高于A、E两组（P<0.05）;A、B两组蛋白高度显著高于D、E两组（P<0.05）;对照组蛋黄颜色显著浅于处理组（P<0.05）;A、B两组哈氏单位显著高于D、E两组（P<0.05）;处理组蛋黄重显著高于对照组（P<0.05）;C组蛋壳重显著低于B、D、E三组（P<0.05）,D组蛋壳重显著高于A、B、C三组（P<0.05）。在52周龄时,B组蛋壳厚度显著低于A、D、E三组（P<0.05）;A组蛋白高度显著高于D组（P<0.05）;C、E两组蛋黄颜色显著高于其余三组（P<0.05）;D组哈氏单位显著低于A组（P<0.05）;处理组蛋黄重显著高于对照组（P<0.05）,对照组为16.71g。3.肝脏、脾脏切片观察采集样品时肉眼可见五组肝脏组织均呈暗褐色,表面光滑,无出血及其他病变。肝脏组织切片结果显示:D组肝细胞板整齐排列,局部出现灶状淋巴细胞浸润;E组肝细胞形态不规则,肝血窦轻度淤血,局部出现灶状淋巴细胞浸润。其余各组脾脏组织均呈红褐色,表面光滑,无出血及其他病变。组织切片结果显示:D组脾小结生发中心变大;E组脾脏组织切片中红髓有轻微程度充血,其余各组无病变。4.免疫指标（1）IgA:在43周龄时,处理组IgA含量显著高于对照组A组（P<0.05）;在46周龄时,B、C两组显著高于A、D、E三组（P<0.05）;在52周龄时,C组显著高于A、B两组（P<0.05）。（2）IgG:在43周龄时,处理组IgG含量显著高于对照组（P<0.05）;在46周龄时,B组含量显著高于A、D两组（P<0.05）;在49周龄时,处理组高于对照组;在52周龄时,C组显著高于A组（P<0.05）。（3）IgM:在46周龄时,E组显著高于D组（P<0.05）;在52周龄时,处理组低于对照组。（4）IgY:在43周龄时,B组IgY显著高于A组（P<0.05）;在46周龄时,C组显著高于A组（P<0.05）;在49周龄时,B、D、E三组显著高于A组（P<0.05）;在52周龄时,处理组显著高于对照组（P<0.05）。（5）IL-2:在43周龄时,A组IL-2显著低于C、D、E三组（P<0.05）;在46周龄时,D组显著高于A、D两组（P<0.05）,处理组高于对照组;在49周龄时,处理组显著高于对照组（P<0.05）;在52周龄时,C,D,E三组显著高于A组。（6）TLR-2:在46周龄时,D组显著高于A、B、C三组（P<0.05）;在49周龄时,B组显著高于A组（P<0.05）,处理组高于对照组;在52周龄时,B组显著高于A、C两组（P<0.05）。5.肠道菌群各组盲肠内容物在门水平上优势物种都为拟杆菌门和厚壁菌门,但所有门类丰度都各不相同。盲肠内微生物在属水平上,优势物种前三位相同。在黄腐酸适当的添加水平（0.05%）条件下,可对于拟杆菌的丰度增加有促进作用。C组shannon指数数值最大,chao指数数值最小,即0.05%黄腐酸有增加肠道微生物多样性、降低丰富度的作用。各组通过β多样性分析可知,五组之间微生物结构差异较小。功能聚集分析结果显示,氨基酸运输和代谢的基因表达量最高,通过KEGG分析结果可知,适当浓度黄腐酸可增强信号分子与相互作用代谢通路的作用。综上所述,黄腐酸添加量为0.05%对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、免疫指标的改善有促进作用,可增加肠道微生物菌群的多样性,增加有益菌拟杆菌丰度,增强信号分子与相互作用代谢通路的作用;黄腐酸添加量超过0.2%会使肝脏、脾脏产生轻微的病变。