桔梗多糖缓解PRV致PK-15细胞自噬的研究

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伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的伪狂犬病会导致母猪生产失败和仔猪大量死亡,因此严重危害我国养猪业的发展。自噬是细胞的一种重要清除机制,在病毒感染细胞时发挥重要作用。许多研究表明,多种病毒已经进化出抑制自噬,或者利用自噬完成自身复制的生存机制,因此自噬作为抗病毒药物开发的作用靶点,受到越来越多研究者的关注。多糖是一种天然聚合物,是植物的重要活性成分。据报道,植物多糖具有免疫调节、抗病毒多种生物活性。桔梗作为我国传统中药,有消炎、清热、祛痰,宣肺等功效。桔梗多糖是其重要活性成分。本文主要探究桔梗总多糖(PGPSt)抗伪狂犬病毒的体外效果,并且进一步探讨其抗病毒作用机制。本研究主要包括以下几个方面:PK-15细胞建立体外感染模型,CCK-8法检测不同感染复数下病毒在4h、8h、12h时对细胞活性的影响和PGPSt在PRV感染下对PK-15细胞的保护作用。PGPSt处理感染后的细胞,细胞活力明显提升。PGPSt(200μg/mL)能够有效地抑制病毒基因组的转录水平。ELISA、Western Blot等方法检测了PGPSt对于病毒蛋白合成的影响。结果显示,PGPSt可以有效减少病毒蛋白的合成。通过自噬检测,发现PRV可以诱导PK-15细胞形成自噬体,造成自噬体的累积,PGPSt处理后可以减少自噬体生成。最后,通过检测自噬小体形成相关信号通路Akt/mTOR的激活状况,发现PGPSt可以通过激活Akt/mTOR信号通路抑制病毒诱导的自噬。抑制mTOR信号通路激活自噬,PGPSt的抗病毒作用减弱。综上所述,本研究发现PGPSt的体外抗伪狂犬病毒的效果,并且这种抗病毒效果是通过抑制病毒诱导的细胞自噬实现的。PGPSt可以激活Akt/mTOR信号通路抑制病毒诱导的自噬,进而影响病毒复制。
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