【摘 要】
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目的:研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂西达本胺对AML细胞增殖活性和lnc RNAs表达的影响及其调控机制。方法:细胞活力采用CCK-8和CFSE方法检测,细胞周期采用PI染色法进行检测,细胞凋亡采用Annexin V-FITC/PI双染法进行测定。通过Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3及其活化形式Cleaved Caspase-3、PARP及其活化形式Cleaved
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目的:研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂西达本胺对AML细胞增殖活性和lnc RNAs表达的影响及其调控机制。方法:细胞活力采用CCK-8和CFSE方法检测,细胞周期采用PI染色法进行检测,细胞凋亡采用Annexin V-FITC/PI双染法进行测定。通过Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3及其活化形式Cleaved Caspase-3、PARP及其活化形式Cleaved PARP,周期相关蛋白CDK6、cyclin D1以及MEK/ERK通路蛋白p-MEK、p-ERK蛋白表达水平。转录组测序分析西达苯胺处理前后AML细胞lnc RNAs表达差异。q RT-PCR验证筛选出来的下调基因VPS9D1-AS1在临床AML标本中的表达情况。利用慢病毒转染技术构建稳定过表达VPS9D1-AS1及敲低VPS9D1-AS1的细胞株,采用上述实验技术验证其对AML细胞增殖活性的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验检测西达苯胺及VPS9D1-AS1的体内效应。结果:西达苯胺抑制AML细胞增殖,使细胞阻滞在G0/G1期,并通过Caspase依赖的凋亡途径诱导AML细胞凋亡。西达苯胺还可以抑制小鼠皮下瘤的增殖。转录组测序发现西达苯胺处理AML细胞（SKM-1和THP-1）后共上调lnc RNAs1195个,共下调lnc RNAs 780个。结合转录组测序结果和GEPIA数据库发现,显著下调的VPS9D1-AS1与AML患者生存具有显著相关性。AML临床标本证实VPS9D1-AS1在AML中高表达。VPS9D1-AS1敲低可抑制AML细胞增殖,导致AML细胞阻滞于G0/G1期,磷酸化MEK（p-MEK）、磷酸化ERK（p-ERK）、磷酸化p38（p-p38）和磷酸化JNK（p-JNK）表达水平减少,VPS9D1-AS1敲低也可抑制小鼠皮下瘤的增殖。过表达VPS9D1-AS1则呈现相反效应。进一步观察发现下调VPS9D1-AS1还可以增强西达苯胺对AML细胞增殖抑制作用,减少磷酸化MEK（p-MEK）、磷酸化ERK（p-ERK）、磷酸化p38（p-p38）和磷酸化JNK（p-JNK）表达水平。结论:西达苯胺可下调VPS9D1-AS1在AML细胞中的表达。VPS9D1-AS1敲低可抑制MEK/ERK信号通路,并增加西达苯胺对AML细胞增殖的抑制作用。
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