猪δ冠状病毒（Porcine Delatcoronavirus,PDCoV）是近年来新现的套病毒目（Nidovirales）、冠状病毒科（Coronaviridae）、冠状病毒（Coronavirus）成员,可引起猪只尤其是新生仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,发病率和死亡率均较高,成为现今仔猪腹泻的主要病源之一。PDCoV传播范围广,2009年中国香港首次在猪的样本中发现,2014年美国从在发病猪群中检出并分离该病毒,随后迅速蔓延至亚洲地区的养猪国家。目前,尚无有效的疫苗和药物用于防控。因此,研制有效、新型和安全的抗病毒药物或者疫苗势在必行。RNA干扰（RNA interference,RNAi）是由ds RNA在细胞内诱导靶向目的基因的mRNA降解,从而使目的基因表达下降或者沉默的现象,在抗病毒和抗癌症方面具有良好的应用前景。运用RNA干扰技术抑制PDCoV感染造成病理损伤相关的技术背景丰富。为此,本研究展开了以下实验研究:1.体外研究shRNA表达质粒对PDCoV感染的抑制效果:构建多个靶向N基因的shRNA表达载体,转染LLC-PK1细胞后,有限稀释法筛选稳定表达的细胞系。将100 TCID₅₀剂量PDCoV接种LLC-PK1细胞,分析感染36 h后细胞损伤、病毒载量和目标基因表达水平等。CPE、Western blot、q RT-PCR、MTS和上清TCID₅₀的分析结果均表明pcDNA3.1-Double-shRNA-N1表达质粒对PDCoV抑制效果最好（92.7%）。2.在哺乳仔猪体内评估pcDNA3.1-Double-shRNA-N1表达质粒拮抗PDCoV感染的效果:将12头未吃初乳的新生仔猪随机分成6组,分别为3个接毒组（转染pcDNA3.1-Double-shRNA-N1、pcDNA3.1-shRNA-NC和未转质粒）和3个对照组（转染pcDNA3.1-Double-shRNA-N1、pcDNA3.1-shRNA-NC和未转质粒）,前腔静脉注射shRNA表达质粒2次。作用24 h后,口服接种PDCoV(10⁵TCID₅₀),从感染前12 h开始每间隔4 h收集粪便,q RT-PCR测定病毒基因组含量。感染48 h后处死仔猪并进行剖解,采集小肠段,观察病理变化情况。剖解病变情况、小肠段组织切片和粪便q RT-PCR结果发现pcDNA3.1-Double-shRNA-N1表达质粒能有效地减少哺乳仔猪体内PDCoV含量,减轻PDCoV对组织细胞的病理损伤。本研究分别在体外和体内不同层次分析了shRNA表达质粒对PDCoV感染的作用效果,证实shRNA表达质粒能够同时在细胞和哺乳仔猪体内有效抑制PDCoV的复制及其引起的特定病变。