磁性免疫-表面增强拉曼光谱法检测肌钙蛋白Ⅰ

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心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)作为早期诊断急性心肌梗死(AMI)的生物标志物而广为人知。表面增强拉曼光谱(SERS)是一种具有极高灵敏度的光谱分析技术,它为深入表征表面结构和过程提供了分子水平的信息,也为生物医学方面的应用开拓了新的局面。本研究建立了两种较灵敏的拉曼免疫传感分析方法用于cTnI检测。第一种方法利用竞争免疫检测模式,通过在壳聚糖包裹的银溶胶表面修饰目标物cTnI及拉曼活性分子5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB),得到标记免疫银溶胶。利用待测溶液中游离的cTnI和标记免疫银溶胶对cTnI抗体修饰磁珠的竞争性结合,实现cTnI的定量检测。在最优条件下,638 nm激光器照射下,1339 cm-1处的拉曼峰强度与cTnI浓度成正比,该方法的线性范围为0.1-50 ngmL-1,精密度为4.79%(n=7,1 ngmL-1),检出限为40 pgmL-1(3σ,n=9),银溶胶基底的增强因子为2.30×104。第二种方法构建了一种较灵敏的适配体-抗体夹心型拉曼免疫传感系统用于cTnI的检测。该纳米传感系统使用DTNB及适配体共同修饰的金纳米粒子(AuNPs)作为SERS免疫探针,cTnI抗体修饰磁珠为捕获基底,AuNPs负载的滤纸作为固相拉曼增强基底,实现了cTnI的夹心免疫检测。SERS免疫探针表现出良好的稳定性及拉曼增强活性。适配体的引入使方法对cTnI具有较好的选择性。在最优条件下,785 nm激光器照射下,1331 cm-1处的拉曼峰强度与cTnI浓度成正比,线性范围为0.050-100 ng mL-1,精密度为6.38%(n=7,9 ng mL-1),检出限为15 pg mL-1(3σ,n=9),AuNPs负载的滤纸基底的增强因子为1.39×106。两种方法均可实现血清样品中cTnI的加标回收测定,证明本方法可用于实际样品中cTnI含量的分析。
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