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小白菜(Brassica chinensis L.)为十字花科芸薹属蔬菜,是典型异花授粉作物,杂种优势明显,而利用雄性不育系育种是杂种优势利用的重要途径。 本研究以胞质雄性不育小白菜为供试材料,通过确立小白菜线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)、基因组DNA(gene DNA,gDNA)简易、高效的提取体系,建立了小白菜RAPD分析的技术体系:从200个RAPD随机引物中筛选出mtDNA RAPD反应有多态性谱带的引物25个,找到了小白菜不育系和保持系之间mtDNA的差异条带,差异条带主要分布于270—3000bp之间,扩增的总谱带数为144条,其中多态性谱带78条,多态性程度为54.2%,每个引物可扩增4—9条多态性谱带,平均扩增出6.26条;从200个RAPD随机引物中筛选出gDNA RAPD反应有多态性谱带的引物20个,找到了小白菜不育系和保持系之间gDNA的差异条带,差异条带主要分布于270—10000bp之间,扩增的总谱带数为107条,其中多态性谱带49条,多态性程度为45.8%,每个引物可扩增1—10条多态性谱带,平均扩增出5.35条。 建立了与小白菜Pol细胞质不育源相关的orf224基因克隆技术体系,从mtDNA和gDNA中克隆了一段特异DNA片段,该片段全长691bp。通过Blast比对,结果表明该片段与orf224的同源性达99%,证明了小白菜雄性不育是由Pol雄性不育源引起的细胞质雄性不育,且该不育源位于线粒体基因组。