【摘 要】
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血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）位于血管壁的中层,其主要功能是收缩,且增殖速率极低。VSMCs的异常增殖和迁移是多种心血管疾病的病理基础,因此探究影响VSMCs异常增殖和迁移的分子机制有利于揭示心血管疾病的发病机理。目前很多研究发现心血管疾病常伴随炎症因子表达上调,且增加的炎症因子通过改变细胞功能调节心血管疾病的发生。最近的研究表明白细胞介素6
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目No.11372190；
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血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）位于血管壁的中层,其主要功能是收缩,且增殖速率极低。VSMCs的异常增殖和迁移是多种心血管疾病的病理基础,因此探究影响VSMCs异常增殖和迁移的分子机制有利于揭示心血管疾病的发病机理。目前很多研究发现心血管疾病常伴随炎症因子表达上调,且增加的炎症因子通过改变细胞功能调节心血管疾病的发生。最近的研究表明白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）在多种心血管疾病患者体内表达上调,且在血管细胞功能中起到重要的调节作用,但是涉及的分子机制尚不清楚。在这项研究中,我们探究了IL-6对人脐静脉血管平滑肌细胞（human umbilical vascular smooth muscle cells,HUVSMCs）增殖和迁移的影响,并对其分子机理进行了探究。为了检测IL-6对HUVSMCs增殖的影响,本研究首先利用IL-6处理HUVSMCs,并设置3个时间梯度:24 h,48 h和72 h,3个浓度梯度:5 ng/m L,10 ng/m L和20 ng/m L。再分别利用溴脱氧尿苷（bromodeoxyuridine,Brd U）,细胞计数试剂盒8（cell count kit 8,CCK8）和5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2-deoxyuridine,Ed U）成像试剂盒检测IL-6对HUVSMCs增殖的影响。为了检测IL-6对HUVSMCs迁移的影响,利用划痕愈合方法检测IL-6处理HUVSMCs后是否对其迁移能力有影响。为了更深入探讨IL-6介导HUVSMCs增殖的机制,利用分子实验蛋白免疫印迹（western blot）技术检测IL-6对信号转导子和转录激活子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）,八聚体转录因子（Octamer transcription factor-1,Oct-1）及共济失调毛细血管扩张蛋白（ataxia telangiectasia mutated,ATM）表达的影响。然后利用免疫荧光细胞化学技术分析IL-6对HUVSMCs中Oct-1分布的影响。其次利用特异性小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）技术抑制Oct-1表达,再通过CCK8及Ed U成像技术检测Oct-1对HUVSMCs增殖的影响。最后为验证IL-6可以通过Oct-1调节HUVSMCs增殖,抑制Oct-1表达后加入IL-6,再次利用CCK8及Ed U成像技术检测HUVSMCs增殖情况。结果发现:（1）IL-6显著促进HUVSMCs增殖和存活,且在20 ng/m L处理时间为48 h时促进效果最明显,然而IL-6对HUVSMCs迁移无明显影响;（2）IL-6处理细胞15 min和30 min时,显著激活STAT3的Ser727位点磷酸化。在6 h,12 h和24 h时促进了Oct-1表达,在24 h时显著增强了ATM表达;（3）免疫荧光细胞化学技术检测结果显示,Oct-1在IL-6处理细胞6 h和24 h后主要位于HUVSMCs的细胞核中,在处理12后Oct-1部分转移至细胞质中;（4）siRNA干扰结果发现抑制Oct-1表达后可以显著的抑制IL-6和ATM的表达,并且抑制Oct-1表达可以显著降低HUVSMCs增殖;（5）抑制Oct-1表达后加入IL-6可以缓解由Oct-1降低的HUVSMCs增殖。以上结果表明:IL-6可以显著促进HUVSMCs增殖,分子研究发现IL-6通过激活STAT3的Ser727位点磷酸化,增强了Oct-1和ATM表达,进而诱导HUVSMCs增殖。该研究为心血管疾病的基础治疗提供了新的线索。
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