【摘 要】
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DNA甲基化是指基因组DNA在DNA甲基转移酶的催化作用下以S腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,通过共价键结合一个甲基基团的化学修饰过程。DNA甲基化作为一种表观遗传学形式在X染色体失活,基因组印迹和基因表达等遗传调控方面发挥重要作用。DNA甲基转移酶可作为一种重要的临床生化指标,DNA甲基化及DNA甲基转移酶的异常变化常常导致各种癌症等疾病的发生。由此我们设计了一种基于对称型哑铃辅助3D四面体空间结构的
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DNA甲基化是指基因组DNA在DNA甲基转移酶的催化作用下以S腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,通过共价键结合一个甲基基团的化学修饰过程。DNA甲基化作为一种表观遗传学形式在X染色体失活,基因组印迹和基因表达等遗传调控方面发挥重要作用。DNA甲基转移酶可作为一种重要的临床生化指标,DNA甲基化及DNA甲基转移酶的异常变化常常导致各种癌症等疾病的发生。由此我们设计了一种基于对称型哑铃辅助3D四面体空间结构的荧光放大效应实现超灵敏检测Dam甲基转移酶,首先独创性设计对称双环哑铃,哑铃茎双链部分的5’-GATC-3’位点在Dam甲基转移酶的特异性识别催化作用下被甲基化,再作用于DpnⅠ核酸内切酶,DpnⅠ酶也将特异性识别剪切存在5’-GATC-3’甲基化位点的双链DNA,通过特异性酶切反应后对称哑铃将形成两相同单链。另外含4个相同发夹的荧光载体3D四面体在一定温控反应下经4条长链快速合成,剪切后一哑铃两相同单链均与四面体末端发夹反应,使发夹打开而产生一定强度的荧光信号,荧光信号的大小与Dam甲基转移酶的浓度成正比,随着酶浓度逐渐稀释降低荧光信号也逐渐降低。本方案的实施成功地实现靶标从0.002-100 U/m L的检测范围和0.00036 U/m L的最低检测限,同时血清实验与5-氟尿嘧啶抑制实验也再次验证了Dam甲基转移酶作为临床生物标志物进行检测的必要性和重要性。
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