【摘 要】
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目的:本课题旨在筛选出新疆五种阿魏根提取物的抗炎活性部位,研究其抗炎镇痛作用,并明确不同部位HPLC各色谱峰变量与所考察的药理效应指标的增减的相关性。方法:细胞实验部分:通过内毒素LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症细胞模型,用新疆五种阿魏根不同极性部位提取物进行干预后,用MTT法检测药物细胞毒性;用Griess试剂法检测细胞上清液中NO的含量,筛选出新疆五种阿魏根的抗炎活性部位。“谱”-“效”相关分析:通过建立不同极性部位HPLC色谱,经过双变量Pearson相关分析,分析不同极性部位对LPS刺激
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目的:本课题旨在筛选出新疆五种阿魏根提取物的抗炎活性部位,研究其抗炎镇痛作用,并明确不同部位HPLC各色谱峰变量与所考察的药理效应指标的增减的相关性。方法:细胞实验部分:通过内毒素LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症细胞模型,用新疆五种阿魏根不同极性部位提取物进行干预后,用MTT法检测药物细胞毒性;用Griess试剂法检测细胞上清液中NO的含量,筛选出新疆五种阿魏根的抗炎活性部位。“谱”-“效”相关分析:通过建立不同极性部位HPLC色谱,经过双变量Pearson相关分析,分析不同极性部位对LPS刺激的RAW264.7细胞产生的NO含量和各主要色谱峰变量之间的关系。动物实验部分:采用二甲苯试剂小鼠耳肿胀法,以小鼠耳肿胀度以及肿胀抑制率为指标评价新疆五种阿魏根醇提总部位的抗炎作用;采用小鼠光热致痛甩尾实验疼痛模型,以小鼠甩尾痛阈值为指标评价新疆五种阿魏根醇提总部位的镇痛作用。结果:细胞实验部分:与LPS对照组比较,地塞米松溶液对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放有抑制作用(P<0.05),且呈明显剂量依赖关系;五种阿魏根乙醇总部位各浓度、二氯甲烷部位(除圆锥茎阿魏)各高浓度、乙酸乙酯部位(除圆锥茎阿魏)各浓度均不同程度抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞的NO的释放(P<0.05),石油醚部位仅有阜康阿魏石油醚部位高浓度、水饱和正丁醇部位仅有托里和大果阿魏水饱和正丁醇部位高、中浓度具有不同程度抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NO的释放(P<0.05),蒸馏水部位各浓度对LPS诱导的RAW264.7细胞的NO的释放没有明显影响(P>0.05),“谱”-“效”相关分析:新疆五种阿魏根不同部位的HPLC图谱共有峰峰面积与NO含量经过双变量Pearson相关分析,托里阿魏保留时间35min、大果阿魏保留时间35和86min、新疆阿魏保留时间40、68、75和78min、阜康阿魏保留时间38、40、65、68、75和86min时具有显著负相关(P<0.05),而圆锥茎阿魏各主要色谱峰变量和NO含量之间没有显著相关(P>0.05)。其中65min和75min时的色谱峰所代表的化合物分别为fekrynol和lehmannolol。动物实验部分:与空白对照组比较,托里阿魏组、新疆阿魏高剂量组、阜康阿魏高剂量组和圆锥茎阿魏低剂量组的肿胀度明显减小,肿胀率有显著性差异(P<0.05),而大果阿魏组的肿胀度也明显减小(P<0.05)。与空白对照组比较,大果阿魏组、新疆阿魏组、阜康阿魏组能够显著延长小鼠的甩尾痛阈值(P<0.05);而托里阿魏组和圆锥茎阿魏组的甩尾痛阈值没有显著性差异(P>0.05)。结论:实验结果表明五种阿魏根乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯部位可能是主要的抗炎活性部位,而阜康石油醚部位、托里和大果阿魏水饱和正丁醇部位有一定的抗炎活性,五种阿魏根蒸馏水部位没有抗炎活性。实验结果表明保留时间为托里阿魏35min,大果阿魏35min和86min,新疆阿魏40min、68min、75min和78min,阜康阿魏38min、40min、65min、68min、75min和86min时所对应的色谱峰所代表的化学成分是与之相对应的阿魏根的抗炎活性成分,值得进一步研究;实验结果表明新疆五种阿魏根乙醇总部位均有一定程度的抗炎作用,大果、新疆、阜康阿魏根乙醇总部位具有一定的镇痛作用。
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