第一部分临床研究目的:评价强心方对于舒张性心衰（心肾阳虚证）患者的临床疗效和安全性。方法:纳入上海市中医医院心病科住院部2017年7月1日至2018年11月1日收治的符合中医辨证分型“心肾阳虚”证,且西医诊断为舒张性心力衰竭（心功能Ⅱ-Ⅲ级）的患者,随机分入对照组或治疗组。对照组予培哚普利片4mg,口服,每天一次+琥珀酸美托洛尔缓释片47.5mg,口服,每天一次,若患者出现明显水钠储溜症状时,则加用呋塞米片20mg,每天一次,口服+螺内酯片20mg,每天一次,口服;治疗组在对照组的治疗基础上,加用强心方（附子6g、肉桂6g、桂枝12g、补骨脂30g、丹参30g、桃仁15g、红花6g、白芍12g、灵芝30g、玉竹18g、泽泻30g、大腹皮30g）,每日400ml,分两次早晚餐后温服,疗程为4周。在第0、2、4周对两组患者的疗效相关数据进行记录,包括心功能分级、LEE氏心衰体征评分、中医症状体征量化积分、NT-proBNP、超声心动图、心率血压、心率变异性等,并每天观察有无安全性事件发生。数据采用SPSS 21.0整理并分析。结果:两组共纳入142例患者,对照组脱落8例,治疗组脱落4例,共计脱落12例,最后完成研究130例。两组患者基线数据具有可比性。心功能分级方面,治疗4周后对照组有心功能Ⅰ级22例（35.9%）,心功能Ⅱ级28例（44.4%）,心功能Ⅲ级13例（20.6%）,心功能Ⅳ级0例（0%）;治疗组有心功能Ⅰ级32（47.8%）,心功能Ⅱ级26例（38.8%）,心功能Ⅲ级9例（13.4%）,心功能Ⅳ级0例（0%）,两组在治疗4周后的心功能分级分布情况无统计学差异（P>0.05）。疗效上,对照组有效35例（55.6%）,无效28例（44.4%）,加重0例（0%）;治疗组有效36例（53.7%）,无效31例（46.3%）,加重0例（0%）,两组治疗4周后的心功能疗效无统计学差异（P>0.05）。LEE氏心衰体征评分方面,在治疗4周时,治疗组相比对照组较低（P<0.05）,组内时间点比较上,对照组在治疗4周后比治疗前下降（P<0.05）;治疗组在治疗2周后比治疗前显著下降（P<0.001）。疗效上,对照组显效6例（9.5%）,有效26例（41.3%）,无效31例（49.2%）,加重0例（0%）;治疗组显效6例（9.0%）,有效45例（67.2%）,无效16例（23.9%）,加重0例（0%）,两组治疗4周后的LEE氏心衰体征疗效在分布上具有统计学差异（P<0.05）。中医症状体征分级量化积分方面,治疗4周时,两组中医症状体征分级量化积分总分的比较具有显著统计学差异（P<0.001）,差值为6.190（95%置信区间:3.602-8.779）,组内时间点比较上,对照组与治疗组中医症状体征分级量化积分均随着疗程的推移而逐步明显下降（P<0.001）。各症状体征中,治疗组在“心悸”、“腹胀”、“气短”、“畏寒”、“胸闷”的评分低于对照组（P<0.05）。疗效评价上,对照组显效1例（1.6%）,有效37例（58.7%）,无效17例（27.0%）,加重7例（11.1%）;治疗组显效15例（22.4%）,有效31例（46.3%）,16例（23.9%）,6例（9.0%）,两组治疗4周后的中医症状体征疗效在分布上具有统计学差异（P<0.05）。NT-proBNP方面,两组间没有统计学差异（P>0.05）,但两组组内NT-proBNP都随着疗程的推进而逐渐有所下降（P<0.05）。超声心动图方面,LVEDD、LVESD、LAD、LVEF、E/A在治疗过程中的两组组间都没有统计学差异（P>0.05）,其中两组组内LVEDD、E/A在治疗4周后均有下降（P<0.05）。组织多普勒成像中,治疗4周时,两组e’的比较具有显著统计学差异（P<0.001）,治疗组相比对照组较高,且治疗组组内e’随着疗程的推进而逐渐显著下降（P<0.001）。两组组间E/e’存在统计学差异（P<0.05）。自主神经功能相关指标方面,首先在治疗2周与治疗4周时,两组心率的比较均有显著统计学差异（P<0.001）。而在血压上,两组组间收缩压和舒张压在治疗过程中均无统计学差异（P>0.05）,组内血压均随着疗程推移而显著下降（P<0.001）。其次在心率变异性指标中,治疗2周与治疗4周时,两组SDNN的比较具统计学差异（P<0.05）,且两组SDNN均随疗程的推移而显著上调（P<0.001）。治疗2周与治疗4周时,两组SDANN的比较具有统计学差异（P<0.05）,治疗组相比对照组升高,且两组组内在治疗4周时SDANN均较治疗前上升（P<0.05）。两组组间rMSSD的比较有显著统计学差异（P<0.001）。治疗4周时,两组pNN50的比较具有显著统计学差异（P<0.001）,治疗组高于对照组,且两组组内pNN50随着疗程的推移逐渐上升（P<0.001）。两组TP在组间及时间点上均无统计学差异（P>0.05）。安全性评价方面,对照组出现不良反应5例,不良反应率7.0%,其中下肢出现水肿2例,自觉胸闷1例和血压偏低2例;治疗组出现不良反应3例,不良反应率4.2%,3例均为腹泻,两组患者不良反应病症均属轻微。另外,两组在治疗前后的血常规、肝肾功能电解质等指标上的变化均在正常值范围内,未见明显异常改变。结论:1、强心方可以改善舒张性心衰患者的心衰体征。2、强心方可以改善舒张性心衰患者的中医临床症状体征。3、强心方可以改善舒张性心衰患者的左室舒张功能。4、强心方可以增加舒张性心衰患者的副交感神经功能活动。5、强心方可能会引起部分患者的轻微腹泻反应,整体安全性较高。第二部分实验研究目的:评价乙酰化去甲乌药碱（Acetyl-Higenamine,AH）对于心肌纤维化和心肌肥厚的干预作用及其相关机制。方法:实验一:乙酰化去甲乌药碱（AH）对心肌纤维化及心肌肥厚的影响作用的体外研究。先取原代乳鼠心肌成纤维细胞,用TGF-β（10ng/ml）诱导其纤维化反应激活,通过检测成纤维细胞纤维化的标志性表型变化蛋白α-SMA及其基因来评价乙酰化去甲乌药碱对于心肌纤维化的影响作用,并且将AH分为0.1、0.3、1、3uM等浓度梯度探索其适宜的工作浓度,再通过检测其他纤维化相关蛋白基因及划痕实验来进一步证实AH对于心肌纤维化的作用。接着取原代乳鼠心肌细胞,用苯肾上腺素（100uM）诱导其肥大,通过免疫染色来观察AH对于心肌肥大的影响作用。实验二:不同剂量乙酰化去甲乌药碱（AH）对异丙肾上腺素（isoprenaline,iso）诱导的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究。60只SPF级8周龄雌性c57BL/6小鼠,随机平均分为空白组、iso模型对照组、iso+AH低剂量组、iso+AH中剂量组、iso+AH高剂量组和iso+去甲乌药碱阳性药物对照（Hige）组。除空白组外,其余每组都接受iso诱导的心肌肥厚造模（皮下注射30mg/kg/d/只）,iso建模同时,AH加载组根据剂量低中高分别进行AH腹腔注射1、3、10mg/kg/d/只的处理,Hige加载组作为阳性药物对照组,予腹腔注射10mg/kg/d/只,连续21天。第22天检测心超后取材,进行病理染色及心肌肥厚、纤维化相关蛋白基因检测。实验三:经口服的乙酰化去甲乌药碱（AH）对iso诱导的小鼠心肌纤维化与病理性肥厚影响作用的体内研究。40只SPF级8周龄雌性c57BL/6小鼠,随机平均分为空白组、AH组、iso模型对照组和iso+AH组。除空白组外,其余每组都接受iso诱导的心肌肥厚造模（皮下注射30mg/kg/d/只）,iso建模同时,AH加载组予灌胃20mg/kg/d/只,连续35天后取材,进行病理染色及心肌肥厚、纤维化相关蛋白基因检测。实验四:乙酰化去甲乌药碱对TGF-β诱导的原代心肌细胞纤维化影响的作用机制的体外研究。取原代乳鼠心肌成纤维细胞,用TGF-β（10ng/ml）诱导成纤维细胞纤维化,检测TGF-β的经典Smad信号通路相关磷酸化或非磷酸化蛋白和基因表达,探索AH对于Smad经典信号通路的影响作用,然后通过使用β受体抑制剂来探索AH是否具有与去甲乌药碱相类似的上游信号靶点。结果:实验一:当AH加载组浓度大于1uM时,经TGF-β诱导的原代成纤维细胞中纤维化反应的标志性表型蛋白α-SMA及其基因的表达较TGF-β模型对照组下降（P<0.05）。并测算得出AH的半数抑制α-SMA的工作浓度大约为2uM。其他纤维化相关基因检测中,AH也可以抑制原代成纤维细胞中由TGF-β诱导的胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、纤连蛋白、转胶蛋白、骨桥蛋白、肌球蛋白、肌钙蛋白的基因的升高（P<0.05）。划痕实验中,AH可以减缓原代成纤维细胞经TGF-β诱导的细胞迁移加快（P<0.05）。另外,AH还可以抑制PE诱导的原代心肌细胞肥大（P<0.05）。实验二:各组小鼠心超结果显示,AH高剂量加载组及Hige 阳性药物对照组LVEDV 相比iso组有所下降（P<0.05）,分别为 0.13±0.02、0.16±0.02（ml）,平均差值分别为 0.072±0.016（ml）（95%置信区间:0.040-0.103）与 0.045±0.013（ml）（95%置信区间:0.018-0.072）;AH高剂量加载组LVESV相比iso组有所下降（P<0.05）,平均值为 0.07±0.01（ml）,平均差值 0.027±0.012（ml）（95%置信区间:0.002-0.052）;AH高剂量加载组LVIDd相比iso组显著下降（P<0.001）,平均值为 3.76±0.22（mm）,平均差值0.635±0.141（mm）（95%置信区间:0.344-0.926）,Hige 阳性药物对照组相比iso组有所下降（P<0.05）,为4.03±0.31（mm）,平均差值 0.373±0.121（mm）（95%置信区间:0.125-0.620）。在心超波形图中,随着AH加载组的药物剂量上升,心脏的收缩及舒张功能逐渐上升,相比阳性药物Hige组,AH高剂量加载组的波形间隔距离变化得更为明显。心超瞬时图像中,iso组小鼠心脏因心肌肥大探及不到左室乳头肌,而AH高剂量加载组和阳性药物Hige组可以探及。生存率方面,iso组小鼠在实验的第7和第9天分别死亡一只,AH低剂量加载组在实验的第9及第13天分别死亡一只,AH中剂量加载组在实验的第14天死亡一只,但各组生存时间之间无统计学差异（P>0.05）。在心脏取材方面,AH加载组为高剂量（10mg/kg）时,HW/BW相较iso组出现统计学差异的下降（P<0.05）,而HW/TL出现显著统计学差异的下降（P<0.001）,这与Hige 阳性药物组的结果相同,并且AH中剂量加载组HW/TL也比iso组有所下降（P<0.05）。胚胎蛋白表达方面,AH中、高剂量加载组以及Hige 阳性药物组Nppa均相比iso组较低（P<0.05）,各药物干预组Nppb仅AH高剂量组较iso组降低（P<0.05）,AH高剂量加载组和Hige 阳性药物组β-MHC均相比iso组较低（P<0.05）。纤维染色方面,在masson染色中,AH中、高剂量加载组的纤维染色面积相比iso组均显著减小（P<0.001）,Hige 阳性药物组比iso组均则有所降低（P<0.05）;在天狼猩红染色中,AH中、高剂量加载组以及Hige 阳性药物的纤维染色面积相比iso组均有所降低（P<0.05）。纤维化相关基因表达检测中,AH中剂量加载组在col-1的表达水平相比iso组有所降低（P<0.05）,AH高剂量加载组在col-1和col-3的表达水平上相比iso组则均显著下降（P<0.001）。实验三:各组小鼠生存情况方面,在35天的实验过程中,iso组小鼠在实验的第12和第13天分别死亡一只,其余各组均未发生死亡,但各组生存时间之间无统计学差异（P>0.05）。各组小鼠心脏取材数据方面,AH加载组HW/BW及HW/TL相比iso组有统计学意义的下降（P<0.05）。HE染色中,AH加载组可以减轻iso诱导的心肌细胞核的排列紊乱。胚胎蛋白表达检测方面,AH加载组ANP、BNP和β-MHC的相应基因表达均较iso组有所降低（P<0.05）。纤维染色方面,AH加载组的masson及天狼猩红纤维染色面积相比iso组均出现有统计学意义的下降（P<0.05）,Hige组却没有相较于iso组的明显改变（P>0.05）。实验四:TGF-β可以激活原代成纤维细胞Smad2/3的磷酸化,在大约30min时达到高峰。而TGF-β+AH可以较TGF-β组p-Smad2/3的表达水平下降（P<0.05）,并且AH可以抑制Smad4蛋白及其基因的表达（P<0.05）,上调Smad7蛋白及其基因的表达（P<0.05）。在β-AR抑制剂实验方面,TGF β+AH组、TGF β+AH+CGP-20712A及TGFβ+AH+ICI-118551组相比TGFβ组α-SMA均下降（P<0.05）,组间没有差异（P>0.05）。结论:1、AH可以在体外通过抑制TGF-β诱导的原代成纤维细胞表型向肌成纤维细胞转化来干预纤维化反应,且半数抑制浓度为2uM,以及可以在体外抑制PE诱导的原代心肌细胞的肥大反应。2、腹腔注射AH（10mg/kg）及口服给药AH（20mg/kg）都可以在体内抑制c57BL/6小鼠经iso诱导的心肌肥厚及心肌纤维化损害。3、乙酰化结构改造加强了去甲乌药碱在体内对iso诱导的小鼠心肌纤维化反应的干预作用。4、AH可以在体外抑制原代成纤维细胞由TGF-β激活的TGF-β/Smad信号通路,但其上游与β-AR无关。