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目的:用不同剂量的rhuIL-2给弓形虫感染的孕鼠腹腔注射,研究感染弓形虫后孕鼠的T细胞亚群、NK细胞的动态变化以及rhuIL-2对孕鼠外周免疫及胚胎的作用。 方法:将80只妊娠第0天的BALB/c孕鼠随机分为4组:空白对照组,实验对照组及两个rhuIL-2处理组,每组20只。实验对照组与两个rhuIL-2处理组于妊娠第8天腹腔感染RH株弓形虫速殖子400个/只,空白对照组腹腔注射0.2ml生理盐水;两个rhuIL-2处理组分别于感染-1、0、1天腹腔注射500U(低剂量组)和2000U(高剂量组)的rhuIL-2,实验对照组与空白对照组注射0.2ml生理盐水。于妊娠第10、12、14和16天分别将孕鼠颈椎脱臼处死,每组5只,解剖孕鼠的子宫,观察胚胎发育情况,记录各组孕鼠活胎、死胎、吸收胎、畸胎的数目,计算平均活胎率并比较各组的差异;取妊娠第12天处死的孕鼠的胎盘、胚胎,用4%的甲醛固定,做弓形虫抗原的免疫组化染色,观察胎盘和胚胎弓形虫感染情况,以胚胎感染计算弓形虫的垂直传播率,比较各组的差异。取不同妊娠期处死孕鼠的脾制成淋巴细胞悬液,用流式细胞仪检测各组孕鼠T细胞亚群及NK细胞水平的变化。 结果与讨论:免疫组化结果表明:妊娠第12天已发生弓形虫的垂直传播,胎盘感染弓形虫后,胎盘的滋养层细胞、绒毛间隙均有大量的弓形虫抗原的表达;在孕鼠子宫的腺体和蜕膜细胞胞浆内也有弓形虫抗原的表达。部分孕鼠的胎盘有弓形虫抗原的表达,而胚胎组织却无弓形虫抗原的表达。弓形虫感染胚胎时,弓形虫抗原主要出现在组织分化区。 与空白对照组相比,感染孕鼠脾CD4~+T细胞在各个时期的水平都较低(只0.05),妊娠第16天后,有轻微的回升;脾CDS+T细胞水平在各个时期呈持续升高的状态,明显高于空白对照组(只0.05)。CD4+/CDS+T细胞比例在妊娠第12、14天都倒置,而妊娠第16天有轻微的回升,但仍低于空白对照组(只0.05)。说明感染弓形虫后,孕鼠T细胞亚群比例失调。感染孕鼠脾NK细胞明显减少,在妊娠各时期的NK细胞都较低,低于空白对照组(只0.05)。孕鼠脾CD4+T细胞水平降低与CDS+T细胞水平升高导致二者比例失调,脾NK细胞水平降低可能是导致弓形虫垂直传播的重要因素。 低剂量rhuIL一2处理组与实验对照组比较,平均活胎率无明显差异,而高剂量处理组明显升高,差异显著(只0.05)。两处理组与实验对照组比较,垂直传播率均明显下降,差异显著(只0.05)。结果显示,一定剂量的rhuIL一2可以使活胎数明显增加、弓形虫的垂直传播率降低,对胚胎起到一定的保护作用。 妊娠第12、14和16天高剂量的rhuIL一2处理组脾CD4+T细胞水平较实验对照组明显升高,可达与空白对照组相近的水平。低剂量组的CD4+T细胞水平与实验对照组相比无明显差异。两rhu1L一2处理组的脾CDS+水平与实验对照组相比,呈明显下降的趋势(只0.05)。总体上看,低剂量的rhuIL一2处理组CD4十/CDS十T细胞比值与实验对照组相比无明显差异,而高剂量组的T细胞亚群比值有所上升,可达空白对照组水平。高剂量rhuIL一2组脾NK细胞数量明显上升,与实验对照组相比有明显差异 (只0.05),提示rhuIL一2可促进NK细胞的增殖。 结论:成功建立了弓形虫垂直传播动物模型。感染弓形虫孕鼠在妊娠期脾T细胞亚群比例倒置,NK细胞数量明显下降,提示细胞免疫受抑是弓形虫垂直传播的重要因素。RhuIL一2应用于感染弓形虫孕鼠,起到一定保护胎鼠的作用,使活胎数目明显增加,并阻止弓形虫的垂直传播。大剂量rhu工L一2可以使感染孕鼠的CD4+T细胞上升,CDS+T细胞水平降低,从而使二者比例回升,同时也起到促进NK细胞增殖的作用,提高了孕鼠的外周细胞免疫水平,对孕鼠和胚胎起到一定的保护作用。弓形虫抗原在胎盘出现的部位提示,胎盘作为局部免疫屏障具有重要的研究价值。