论文部分内容阅读
目的:研究全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid,ATRA）能否逆转非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）富集干细胞样细胞介导的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI）耐受,并探讨其潜在的机制。方法:运用突变扩增系统（amplification refractory mutation system,ARMS）法检测NSCLC细胞的基因突变状态;应用结晶紫染色法检测吉非替尼和ATRA对NSCLC细胞的生长抑制作用;采用流式细胞术检测NSCLC细胞乙醛脱氢酶A1（aldehyde dehydrogenase A1）的活性及CD44的表达。结果:H1650细胞及高浓度吉非替尼诱导四代后残留活细胞均为EGFR19-Del基因突变;A549细胞及高浓度吉非替尼诱导四代后残留活细胞均未检测到EGFR基因Exon-18、Exon-19、Exon-20、Exon-21外显子突变。短时间高浓度吉非替尼诱导NSCLC细胞不会发生EGFR基因二次突变。以高浓度吉非替尼诱导H1650细胞四代,建立吉非替尼耐受细胞（H1650/GR）,与亲代H1650细胞相比,H1650/GR细胞IC50提高1.61倍,耐受吉非替尼能力显著增强（P<0.001）,ALDHA1活性和CD44表达也显著升高（P<0.05）;高浓度吉非替尼诱导A549四代,建立对吉非替尼耐受细胞（A549/GR）,与亲代A549细胞相比,A549/GR细胞IC50提高1.35倍,耐药能力显著增强（P=0.001）,A549/GR细胞ALDHA1活性和CD44表达均显著升高（P<0.05）。提示吉非替尼诱导NSCLC四代后富集了干细胞样标记物ALDHA1和CD44。IC20浓度ATRA诱导H1650/GR 1/3/5天与未加ATRA组相比,其ALDHA1活性和CD44表达均显著降低（P<0.05）（其中ALDHA1活性至第5天已下降6.81倍,CD44表达比例下降2.44倍）,序贯吉非替尼培养72h后,结果发现:与未使用ATRA诱导组相比,ATRA诱导组IC50明显下降（P<0.05）(其中ATRA诱导5天组IC50已下降1.49倍),ATRA诱导组对吉非替尼反应显著提高;IC20浓度ATRA诱导A549/GR 1/3/5天与未加ATRA组相比,其ALDHA1活性和CD44表达均显著降低（P<0.05）（其中ALDHA1活性至第5天已下降9.75倍,CD44表达比例下降2.48倍）,序贯吉非替尼培养72h后,结果发现:与未使用ATRA诱导组相比,ATRA诱导组IC50明显下降（P<0.05）(其中ATRA诱导5天组IC50已下降1.28倍),ATRA诱导组对吉非替尼反应显著提高。ALDHA1与CD44呈强正相关（P<0.01）,提示ALDHA1与CD44可作为NSCLC的共表达干细胞样标记物。结论:短时间高浓度吉非替尼能诱导NSCLC富集ALDHA1hi CD44hi干细胞样细胞。ATRA通过下调ALDHA1活性可逆转NSCLC干细胞样细胞介导的EGFR-TKI耐受。