随着对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发病机制认识的不断深入,改善糖脂毒性并控制其引起的慢性炎性损伤已成为T2DM临床治疗的核心。而骨骼肌AMPKα2以其对糖脂代谢及炎性反应的强大调控能力成为了近年来学术界研究的热门靶点,AMPKα2的激活不仅可抑制NF-κB信号途径介导机体的慢性炎症,还可通过与PPAR-γ的信号联动进一步改善机体代谢性炎性损伤。益气降浊推拿法是根据导师孟凤仙教授提出的T2DM前中期“脾肾气虚,痰浊互结”的核心病机,以及本人在大量临床实践基础上总结、完善、拟定的一套治疗本病的推拿方法,本法具有益气健脾补肾,化痰降浊祛瘀的功效。此次研究在国家自然基金项目(No.81574092)及北京中医药大学青年教师项目(2016-JYB-JSPY-041,2017-JYB-JS-104)的资助下,①明确了益气降浊推拿法的临床疗效及优势,②初步揭示了该法改善实验动物糖脂代谢性炎性损伤的效应机制。1临床研究目的观察益气降浊推拿法对气虚浊阻型T2DM患者血糖、血脂、临床症状及生活质量的影响,初步分析其疗效及安全性。方法采用前瞻性非随机对照研究方法,在2017年2月至2017年12月之间于北京中医药大学东方医院收集气虚浊阻型T2DM病例,并根据患者意愿分别纳入对照组和治疗组:对照组运用常规降糖西药治疗,治疗组在常规降糖西药基础上联合益气降浊推拿法治疗,疗程均为12周。治疗过程中对安全性进行观察,治疗12周后对疗效进行分析。(1)主要评价指标:FPG、2hPG、HbA1c;(2)次要评价指标:①TC、TG、LDL-c、HDL-c;②中医症状积分;③DMQLS生活质量积分;(3)安全性指标:治疗过程中不良反应以及肝肾功能、心电图、血常规等。结果共纳入病例54例,脱落6例,实际完成48例,其中对照组30例,治疗组18例。两组患者性别、年龄、病程、BMI、HbA1c、FPG、2hPG等基线资料一致(P>0.05),具有可比性。(1)主要评价指标:与治疗前比较,治疗组及对照组FPG在第8,12周均显著下降(P<0.05,P<0.01)。组间比较,治疗组在第4、8、12周FPG水平下降趋势较对照组更为显著;与治疗前比较,治疗组2hPG在第4、8、12周均显著下降(P<0.01),对照组2hPG在第8,12周均显著下降(P<0.05)。组间比较,治疗组在第4、12周2hPG值低于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组HbA1c水平均显著下降(P<0.05,P<0.01)。组间比较,治疗组HbA1c下降趋势较对照组更为显著。总有效率:治疗组93.33%,对照组77.78%,治疗组显著高于对照组(P<0.05)。(2)次要评价指标:①与治疗前比较,治疗组TG水平显著降低(P<0.05),各组TC、LDL-c、HDL-c水平均未见明显变化。②与治疗前比较,治疗组中医症状积分在第4、8、12周均显著下降(P<0.05,P<0.01),对照组中医症状积分在第8、12周显著下降(P<0.05);组间比较,治疗组在第12周中医症状积分显著低于对照组(P<0.05)。③与治疗前比较,治疗组DMQLS积分在第8、12周显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),对照组DMQLS积分在第12周显著降低(P<0.05)。组间比较,治疗组在第8、12周DMQLS积分显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。对DMQLS包含的疾病、心理、生理、社会及满意度五个维度进行亚组分析后发现,与治疗前比较,对照组在疾病及生理两个维度的积分显著下降(P<0.05,P<0.01),治疗组在疾病、心理、生理及满意度四个维度的积分显著下降(P<0.05,P<0.01);治疗组在满意度维度的积分显著低于对照组(P<0.05)。(3)在12周的治疗过程中,两组患者安全性指标均未见明显异常,且无不良反应发生。结论益气降浊推拿法联合常规降糖药物可进一步改善气虚浊阻型T2DM患者的FPG、2hPG、HbA1c、TG水平及临床症状,并从多维度提高患者生活质量。2实验研究目的研究益气降浊推拿法是否可通过调节免疫炎性负调节信号链AMPKα2/PPAR-γ,进而抑制炎症通路激活关键因子NF-κB功能,改善肥胖型T2DM大鼠的代谢性炎性损伤。以期初步揭示推拿改善T2DM的手法效应机制,为今后推拿相关机制的研究提供实验基础及研究思路。方法4周龄健康雄性SPF级Wistar大鼠,高脂饲料喂养4周后,按35mg·kg-1 一次性腹腔注射1%浓度STZ溶液,72小时后,以空腹血糖(FPG)≥11.1mmol/L,视为造模成功。将成模大鼠32只随机分入模型组、西药组、推拿组与西药推拿组,另设正常组大鼠8只。干预8周,腹腔麻醉,取血后处死,并留取腹直肌及腹部脂肪组织标本。氧化酶法检测血清FPG、TC及TG含量,ACS-ACOD法检测血清FFA含量;HE染色观察骨骼肌与腹部脂肪形态学变化;Realtime-PCR检测骨骼肌AMPKα2、GluT4、NF-κB及腹部脂肪PPAR-γ、IL-6的mRNA转录水平;Western blot骨骼肌AMPKα2及NF-κB的蛋白表达水平;ELISA检测骨骼肌GluT4及腹部脂肪PPAR-γ、IL-6的蛋白表达水平,免疫组化技术检测骨骼肌AMPKα2、GluT4、NF-κB及腹部脂肪IL-6的蛋白表达水平。结果(1)血糖与血脂指标的生化检测:与治疗前比较,各治疗组FPG在第2、4、8周,均显著下降(P<0.05,P<0.01)。组间比较,各组治疗前FPG均较空白组显著升高(P<0.05);与模型组比较,西药组FPG在第2、4、8周均显著下降(P<0.05,P<0.01),推拿组FPG在第4、8周显著下降(P<0.05),西药推拿组FPG在第2、4、8周均显著下降(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,西药推拿组在第4周对FPG调节效应更为显著(P<0.05);与推拿组比较,西药推拿组在第4、8周对FPG调节效应更为显著(P<0.05)。与空白组比较,模型组TC、TG及FFA水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,西药组TG及FFA水平均显著下降(P<0.05),推拿组TG及FFA水平均显著下降(P<0.05),西药推拿组TG及FFA水平均显著下降(P<0.05,P<0.01)。(2)骨骼肌与脂肪组织的HE检测:与空白组比较,模型组肌间结缔组织轻度增加,血管扩张、充血,周围可见炎细胞散在浸润(P<0.01)。与模型组比较,各干预组水肿程度均有不同程度减轻,扩张、充血的血管数目减少,其中西药推拿组肌纤维排列较其他各组更为规则、紧密,萎缩肌束减少,环层小体可见,细胞周围水肿程度最轻(P<0.05)。与空白组比较,模型组以白色脂肪弥漫性生长方式为主,腺叶状棕色脂肪罕见,部分脂肪细胞体积与数目增加,部分区脂肪间毛细血管增生、扩张,充血,管周可见散在炎细胞浸润(P<0.01)。与模型组比较,各干预组炎细胞数目均有不同程度的减少,扩张、充血的血管数目减少,脂肪细胞数目及体积均减少((P<0.05)。(3)骨骼肌 AMPKα2、GluT4、NF-κB,脂肪 PPAR-γ、IL-6 的 Realtime-PCR 检测:与空白组比较,模型组AMPKα2、GluT4、PPAR-γmRNA转录均下降(P<0.05,P<0.01),NF-κB、IL-6mRNA转录水平升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,西药组、推拿组、西药推拿组AMPKα2及GluT4mRNA转录水平均升高(P<0.05),NF-κBmRNA转录水平均下降(P<0.05),IL-6mRNA转录水平均有下降趋势(P>0.05)。(4)骨骼肌AMPKα2及NF-κB的Westernblot结果显示:与空白组比较,模型组AMPKα2蛋白表达下降(P<0.05),NF-κB蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,西药组、推拿组、西药推拿组AMPKα2蛋白表达均升高(P<0.05),推拿组、西药推拿组NF-κB蛋白表达下降(P<0.05)。(5)骨骼肌GluT4,脂肪PPAR-γ、IL-6的ELISA结果显示:与空白组比较,模型组GluT4、PPAR-γ蛋白表达下降(P<0.05),IL-6蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,西药组、推拿组及西药推拿组GluT4蛋白表达均升高(P<0.05),IL-6蛋白表达均显著下降(P<0.01)。(6)骨骼肌AMPKα2、GluT4、NF-κB,脂肪IL-6的免疫组化结果显示:与空白组比较,模型组AMPKα2、GluT4蛋白表达显著下降(P<0.01),NF-κB、IL-6蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,西药组、推拿组、西药推拿组AMPKα2、GluT4蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB、IL-6蛋白表达均显著下降(P<0.01);与推拿组比较,西药推拿组GluT4蛋白表达升高(P<0.05),IL-6蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论益气降浊推拿法可通过激活骨骼肌AMPKα2/GluT4信号链,恢复肥胖型T2DM大鼠的糖脂代谢水平,同时通过抑制炎症通路关键因子NF-κB表达,减少其下游IL-6等促炎因子的蓄积,最终发挥改善代谢性炎性损伤的手法效应。