目的:通过免疫共沉淀联合质谱筛选果蝇Tap蛋白的互作因子,探索tap基因在果蝇神经发育中的调节机制。方法:(1)免疫荧光和Western blot方法检测tap转基因果蝇品系中HA标签的表达利用免疫荧光染色观察HA标签在tap转基因果蝇体内表达模式是否正确;通过Western blot检测Tap-HA蛋白其大小是否正确,并据此判断HA标签是否正常工作。(2)免疫共沉淀及Western blot检测Tap-HA标签靶蛋白的表达使用IP级别的HA抗体识别并拉取果蝇胚胎全蛋白中与Tap-HA互作的蛋白,然后用HA标签抗体再次检测Co-IP后的标签靶蛋白。(3)质谱鉴定并筛选与Tap-HA蛋白相互作用的因子利用质谱仪LC-MS/MS鉴定通过Co-IP获得的与Tap-HA相互作用的蛋白液成分,再通过数据库分析,文献检索与标签靶蛋白Tap-HA相互作用的蛋白,并按照细胞定位,生物过程和分子功能等注释分类,进一步筛选可能与Tap互作的蛋白。结果:(1)利用免疫荧光染色HA标签,发现在果蝇胚胎13期腹部神经索有Tap-HA标签绿色荧光信号;通过Western blot检测,大约在45KDa处可见一个清晰的目的蛋白条带。(2)免疫共沉淀后的电泳银染结果提示IP实验组蛋白显著富集,有多条蛋白分离条带,肉眼可观45KDa处有一条清晰条带,Ig G对照组可见数条分离蛋白条带,Input组蛋白条带最多,在45KDa处可看到清晰条带。此结果表明CoIP成功的富集到与靶蛋白互作的蛋白。(3)质谱仪LC-MS/MS的鉴定结果:实验IP组鉴定到535个蛋白,IgG组鉴定到458个蛋白。其中,两组样品同时鉴定到相同蛋白255个,Ig G样品组、IP样品组分别鉴定到的差异特有蛋白质数分别是203、280个;通过生信分析,筛选出与靶蛋白互作的候选因子Nerfin-1,Da,Beag,Nab2,Pnuts,Taf6,If。结论:本实验通过免疫共沉淀,成功的富集到与Tap-HA标签靶蛋白互相作用的蛋白;免疫共沉淀联合质谱鉴定出280个与靶蛋白直接或间接相互作用的蛋白,通过对候选蛋白功能注释及生物信息软件分析,筛选出Nerfin-1,Da,Beag,Nab2,Pnuts,Taf6,If与Tap相互作用,在tap转录调控过程中发挥主要作用,为tap基因功能机制研究打下坚实的基础。