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研究背景:急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是感染、创伤、中毒、急性胰腺炎、休克等心源性因素以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性、顽固性低氧血症和呼吸衰竭。目前,ARDS病理生理机制还不是很清楚。其病理改变主要表现为:肺泡上皮细胞损伤,肺血管内皮细胞损伤并毛细血管通透性增大,大量胶原蛋白沉积,大量炎症细胞浸润并释放过量炎性介质,肺泡水肿或者塌陷、肺泡间隔增宽和肺纤维化的形成。有研究发现wnt/β-catenin信号通路在ARDS患者的肺泡上皮细胞损伤和肺组织纤维化过程过中被异常激活,这提示Wnt/β-catenin信号通路可能在ARDS过程中起作用。考虑到Wnt/β-catenin信号通路可能参与ARDS过程,本实验以Wnt/β-catenin信号通路为研究靶点,采用盲肠结扎(CLP)术建立SD大鼠脓毒症急性肺损伤模型;通过腹腔注射XAV939小分子化合物抑制Wnt/β-catenin信号通路来观察Wnt/β-catenin信号通路对脓毒症急性肺损伤的影响。这将为通过调节Wnt/β-catenin信号通路来治疗脓毒症急性肺损伤这一新策略提供重要的理论基础。研究目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对脓毒症急性肺损伤的影响研究方法:选取250±10g健康成年SD雄性大鼠50只,随机分为三组:第一组:对照组(control组),共10只,仅进行麻醉后,打开腹腔,找到盲肠后放回腹腔,给予缝合处理;第二组:脓毒症急性肺损伤组(CLP组),共20只,具体操作过程见实验部分;第三组:用药组(CLP+XAV939组),共20只,在CLP术后,CLP+XAV939组大鼠在术后第一天和第二天给予腹腔注射XAV939处理,具体操作过程见实验部分。观察对照组、CLP组和CLP+XAV939组三组大鼠之间活动度以及死亡率的差异。48小时后处死大鼠并取大鼠肺组织进行下一步检测。采用Westen-Blot(WB)技术检测肺组织内Wnt信号通路关键蛋白的表达情况和肺组织内炎性因子表达情况;肺组织病理切片观察大鼠肺组织病理损伤程度的变化情况;免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)实验手段检测Wnt信号通路关键蛋白在肺组织内的表达量和表达部位;实时定量PCR(Real-time PCR)技术观察Wnt信号通路关键蛋白基因表达水平的变化情况。研究结果:CLP术成功建立脓毒症感染模型。CLP组与control组比较发现:CLP组大鼠组在48小时内死亡率为40%而control组大鼠死亡率为0,CLP组大鼠嗜睡,活动明显减少,体重下降约20%;CLP组大鼠肺组织内炎性因子TNF-α表达量明显升高;CLP组大鼠肺组织病理切片观察到肺泡水肿和塌陷,肺泡间隔增厚增宽并大量炎症细胞浸润,肺血管充血明显;WB检测发现在CLP组中Wnt信号通路关键蛋白β-catenin及Cyclin D等表达量较control组明显升高;IHC提示CLP组大鼠肺组织内炎症细胞,支气管上皮细胞,肺泡细胞等细胞均有大量β-catenin蛋白表达;IF中也显示在CLP组大鼠肺组织内表达大量胞膜蛋白LRP5/6;Real-time PCR显示在CLP组大鼠肺组织内β-catenin m RNA表达量升高。给予腹腔注射XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路后CLP+XAV939组与CLP组比较发现:CLP+XAV939组大鼠死亡率为0;CLP+XAV939组大鼠活动度与control无明显差异;CLP+XAV939组大鼠体重下降率为10%,下降率小于CLP组;CLP+XAV939组大鼠肺组织病理切片发现肺病理损伤程度较CLP组明显减轻;CLP+XAV939组大鼠肺组织内炎性因子TNF-α和β-catenin蛋白、Cyclin D蛋白表达量较CLP组均明显降低;Real-time PCR显示CLP+XAV939组大鼠肺组织内β-catenin的m RNA表达量较control组无明显差异,但是较CLP组明显降低。结论:在本研究中,通过对脓毒症动物模型的研究发现Wnt/β-catenin信号通路参与脓毒症急性肺损伤过程;腹腔注射XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路可减轻肺病理损伤程度,这为脓毒症急性肺损伤提供了新治疗策略并且对改善临床上脓毒症引起的高死亡率风险具有重要意义。