第一部分 慢性萎缩性胃炎发病模拟实验 从CAG到胃癌演变的机理尚未阐明，假定模式认为有慢性萎缩性胃炎(CAG)→肠上皮化生(IM)→不典型增生(DYS)→肠型胃癌的过程。CAG癌变是一个复杂的过程，环境因素改变、机体遗传变异和各种干预措施均会导致疾病自然病程的改变，因此临床研究难以真正反映CAG及癌变的发病机制。人类疾病动物模型有助于探讨疾病发展过程、致病因素及发病机理。本研究通过模拟人类CAG发生的致病因素包括Hp(幽门螺杆菌)感染、胆汁反流、酒精和药物作用，首次建立符合中国人胃窦为主和美国休斯顿诊断标准，稳定可复制的大鼠CAG疾病模型。我们提出CAG是“胃窦黏膜受长期炎症刺激，导致黏膜深层损害和腺体破坏，最后腺体不完全再生”的发生理论，CAG动物模型对进一步探讨CAG发病机理和药物筛选提供可靠依据。 材料和方法 用60％酒精和20mmol／L去氧胆酸钠给雄性SD大鼠(体重180～220g)灌胃(1ml／kg)，0.1％氨水代水自由饮用，共24周建立CAG模型(模型1)。另一模型(模型2)的制作选用雄性Wistar大鼠(体重130～150g)，每天2％水杨酸钠2ml灌胃，20mmol／L去氧胆酸钠代水自由饮用，共6周。模型制作结束后，各组大鼠2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。剖腹暴露全胃。取出全胃沿胃大弯切开，观察胃黏膜的色泽、弹性、皱襞和黏液多少等大体情况。分别沿小弯侧和大弯侧条状取材，10％中性甲醛液固定，石蜡包埋，制成厚度5μm切片行H-E和A-B染色。参照1994年美国休斯顿胃炎诊断标准，用半定量方法观察胃窦炎症细胞浸润的程度(0～3七个级别)、胃黏膜腺体厚度(μm)和胃腺体数目(个)。模型2大鼠另在胃窦和胃体交界处取5mm×5mm大小标本，用扫描电镜观察大鼠胃黏膜有无破损、溃疡和黏液厚度等情况。 结果 大鼠CAG的胃黏膜大体观和病理检查结果均符合胃窦为主萎缩性胃炎的休斯顿诊断标准。从胃黏膜大体观上看，大鼠CAG胃壁弹性减少，黏膜层变薄，色苍白，皱襞变平或消失，黏液减少。扫描电镜可见胃黏膜广泛破馈脱落，细点状出血，表面黏液稀薄。光学显微镜可见大鼠CAG胃窦黏膜腺体排列紊乱、稀疏，黏膜厚度下降，黏膜肌层增厚，向黏膜固有层伸展呈分枝状插入腺体之间。H-E和A-B染色发现部分大鼠有肠化现象，可见胃小凹和胃腺体间有杯状细胞聚集，部分成团排列。大鼠胃窦腺体间伴有大量中性粒和淋巴细胞浸润，与正常大鼠比较，模型大鼠胃窦黏膜的炎症指数明显增加(P＜0.05)，黏膜腺体厚度(μm)和单位长度腺体数目(个)显著下降(P＜0.01)。 结论 成功建立符合中国人胃窦为主和休斯顿胃炎诊断标准的大鼠CAG模型。CAG病理形成是因为各种致病因素长期刺激破坏胃黏膜屏障，进一步导致胃黏膜深层炎症损害和腺体破坏，腺体不能完全再生，最终发生腺体萎缩和／或肠化。浙拿〔大学冲卜沦交 第二部分鼠慢性葵缩性胃炎细胞与分子生物学调控机制探讨 CAG的发生发展和癌变是多囚素参’歹，涉及多种分子产卜物学变异、多阶段、多步骤的过不、!。其，}，核心问题是胃私膜细胞琳狱和凋l’:过程失衡，它可以导致细胞DNA乍行配修复、微IJ星不稳定和基因表达不稳定等事件发产l毛增加，而细胞凋1’.的减少和/或过度恶性增狱，可以使突变细胞聚集，发生癌变。我们通过对CAG的细胞周期调控机制的研究，了解胃癌’it期发产卜的分户1:.物学事件。研究通过分r产}:.物学技术测定胃赫膜到1织，}，‘}:.长囚子调控变化、系统性筛选动物同源人类疾病功能J.七林!(乡泉基林1/抑癌基I人1)和凋I’;抑制调节蛋「IrfJ表达情况，发现CAG发‘l:.fl.!·存价:细胞增娥和凋!’.失衡，表皮产}:.长因r类激素是爪要的胃粼膜细胞增狱调竹”太，细胞增殃，!，存在癌基Ikl蛋自的高表达和抑癌基因的低表达，提示CAG有燕变倾向。监测基囚调控变化对预测CAG及fil.期胃癌的发生有取要价值。材料和方法按第·部分方法综合采川60%洒精、20mmol/I去氧胆酸钠和0.1%氨水建命鼠C八G模型。模型建i’f.后颈动脉取而.sm!，离心后取币t清按照放免法和EI廿ISA法测定人鼠而.清表皮/t:.长因r(EGF)和胃泌素(GAS)水平。采用分光光度测定刀‘测定胃勃膜氨基己搪含最。按照免疫组化Envision一几步法分析胃窦G细胞、表z支‘t:.长I大1子受休(FGFR)、e一erbB一2、pZ一、p53、p16和bel一2基l人l蛋I‘I一表达情沉。t)J);)J 11·抗EGFR多克隆抗休(Santa Cruz公司)，抗C一e由B一2多5lLi，降J六;f本(New Mark一e公司)，介三室温卜孵育30 min，再滴加Envision.，.抗 (oako公、刁)孵育30 min，PBS漂洗1 5 min，滴加DAB溶液显色，镜下观察3一smin。，二八:玻);滴加抗人鼠pZI、v53、pl6、bel一2抗体(批号分别为1602、13002、DI82、1302，‘.，rll‘l月物试剂公司)，室温卜孵育30min，再)]!!，几抗EnvisionHRP兔抗体及鼠抗f本(批号GK4003os、GK礴00一05，DAKO公司)孵育30 min，TBS漂洗Iomin，加OAB显色液，显色10min。在荧光显微镜卜，侮张切片取胃瀚膜5个视野，通过Lelca Qwin图像分析系统观察阳性表达。以人乳腺癌标本作为E(;FR、e一erbB一21马I性对一照:p53、p 16、p21阳性染色?