传统发酵牦牛酸奶中降胆固醇乳酸菌的筛选及其对高脂模型大鼠的益生作用

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有研究表明,血脂过高与冠心病等心脑血管疾病的发病率呈正相关。而目前心脑血管疾病已成为人类死亡的主要原因。近年来,有研究者发现一些具有益生作用的乳酸菌活菌制剂或是相关发酵产品都具有一定的降胆固醇功能,因此具有降胆固醇等益生特性的乳酸菌越来越受到人们的关注。本研究从青海省果洛藏族自治州四个不同牧区的牧民家中采集的16份传统酸牦牛乳中分离出115株乳酸菌。结合16SrRNA序列分析和菌株的降胆固醇能力,从中筛选出21株菌。通过体外模拟试验进一步筛选出可以抵抗胃肠液并能在肠道粘附定植的优良菌株,最后研究其对高脂模型大鼠的益生作用。研究结果如下:(1)筛选得到了115株菌,经过16SrRNA序列分析鉴定出这些菌属于9个种或亚种。115株菌中有59株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、13株德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis)、12株类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、5株耐久肠球菌(Enterococcus durans)、7株粪肠球菌(Enterococcus faecal is)、8株敦鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)、8株肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)、2株肠膜明串珠肠膜亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides)和1株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)。(2)通过降胆固醇乳酸菌的筛选,这115株菌在本试验条件中均具有一定的降胆固醇能力。在分离纯化得到的115株菌里胆固醇降解率在50%以上的菌株有44株,占总数的38.26%。其中降胆固醇能力最强的是植物乳杆菌Lpl,其降解率为75.91±1.74(%),此外类干酪乳杆菌Lpal和植物乳杆菌Lp2、Lp3、Lp4、Lp5的胆固醇降解率也达到了70%以上。(3)通过体外模拟试验得到了一株具有良好抗性的菌株—植物乳杆菌Lp3。人工胃液消化3小时后该菌的存活率为92.48%,在人工肠液中消化24小时后的存活率为61.24%。且该菌株对胆盐不敏感,在含有0.3%胆盐迟滞期为0.71小时。它的表面疏水率为58.41±9.44(%),表明该菌对细胞有较强的黏附性。(4)动物试验结果表明植物乳杆菌Lp3对大鼠没有任何明显的毒副作用,对高脂模型大鼠具有良好的降血脂效果。饲喂高脂饲料并灌喂乳酸菌Lp3组大鼠(HL)的血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量较饲喂高脂饲料组(HC)显著减少(P<0.05),但是高密度脂蛋白胆固醇的含量变化并不明显。饲喂高脂饲料不但会使模型大鼠粪便中含水量减少,而且会引起肠道菌群失衡。HC组大鼠与HL组及饲喂普通日粮组(对照组)大鼠相比较,HC组大鼠粪便中大肠杆菌数量明显增加,双歧杆菌、乳杆菌数量明显减少。但是灌胃乳酸菌的HL组大鼠的粪便中乳杆菌数略高于对照组,大肠杆菌和双歧杆菌数量和对照组大鼠的基本一致。表明植物乳杆菌Lp3具有维持肠道菌群平衡的作用。此外灌胃乳酸菌后HL组大鼠粪便含水量比HC组要高6.44%。HC组大鼠肝脏组织中胆固醇和甘油三酯要显著高于HL组(P<0.05),说明Lp3可以减少脂类物质在肝脏组织中的沉积。从肝脏组织切片来看,也可以得出上述结论。HL组大鼠粪便中胆固醇和胆汁酸含量都比HC组高,说明Lp3可能是以共沉淀的形式来促进胆固醇排泄,从而降低机体内的胆固醇含量。以上结果都表明本研究所筛选的植物乳杆菌Lp3对高脂大鼠具有良好的益生作用。
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