新城疫F48E9毒株和Lasota毒株感染鸡胚成纤维细胞后部分细胞因子差异表达的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong418
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度接触性、毁灭性的传染病,给我国养禽业造成了巨大的经济损失。根据新城疫病毒感染鸡的临床症状,将其分为3类,即速发型(强毒株)、中发型(中等毒力毒株)及缓发型(弱毒株),不同毒株的致病性不同。鸡细胞因子是介导免疫系统的细胞与细胞之间信号传递的重要可溶性介质。鸡细胞因子在免疫调节和抗感染免疫中具有重要的作用。因此,为了更好的了解病原致病的潜在的过程和致病的分子机理,研究细胞因子的表达情况可以为复杂的免疫应答提供依据。本研究从细胞水平入手,以感染新城疫强、弱毒的鸡胚成纤维细胞为模型,研究了9个细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达情况,为病毒感染后细胞因子在鸡胚成纤维细胞当中生物学功能以及新城疫病毒感染的分子机理的研究提供依据。根据GenBank上鸡干扰素-α(IFN-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素2(IL-2)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、白介素13(IL-13)、白介素15(IL-15)、白介素16(IL-16)和白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因作为内参基因,采用SYBR Green I染料法,建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线。结果如下:鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×104~2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数为0.997-1.000。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,建立的鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡细胞因子的定量分析奠定了基础。用建立的Real-time PCR方法检测NDV F48E9、Lasota毒株感染后0、4、8、12、24、36小时鸡胚成纤维细胞中IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因的差异表达情况如下:IL-15和IL-18在4小时、8小时、12小时、24小时F48E9感染组、Lasota感染组与对照组差异极显著,表达量均显著低于对照组。而36小时F48E9感染组与对照组相比差异显著,F48E9感染组细胞因子IL-15和IL-18表达量快速上升,高于对照组表达量;同时Lasota感染组表达情况不一样,仍然低于对照组。IL-10一直未检测到表达。其它细胞因子的表达呈现波动性变化。结果表明,鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因均参与了对NDV的免疫应答反应,其中IL-2、IL-6、IL-15、IL-16和IL-18对NDV强弱毒株感染后免疫应答模式存在明显差异。这为进一步了解NDV感染与免疫的分子机制提供了有价值的研究资料。
其他文献
金字塔控股结构下的掏空行为研究是一个前瞻性课题,它对于丰富和发展我国股权控股结构理论,提高金融监管部门对金字塔控股结构企业的监控能力,保护中小股东的利益具有现实的
“城中村”的研究虽然起步较晚(始于1990年代),但已硕果累累;“城郊村”也有一部分研究成果,然而介于“城中村”和“城郊村”之间还有一类“发展型城中村”,其特征介于前两类
地方政府是一个具有相对独立利益和发展目标的主体,在代表国家履职的过程中,各级地方政府具有因地制宜的自主权,在社会治理与社会发展过程中扮演着独特的角色。近年来,在乡村
资阳市生猪产业发展迅速,成为四川省三大畜牧强市之一。资金是生猪产业发展的关键要素,主要包括财政投入和金融融资。资阳市积极探索多元化投入新模式作为现代农业发展的重要
我国建筑企业在面对国际优秀建筑企业进入国内竞争的形势下,不断努力开拓海外市场,充分利用技术人员素质高和成本低的优势,较好地开拓了亚洲、非洲、南美洲等大量国际市场,业
[目的]葡萄膜黑色素瘤是一种成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤,主要来源于葡萄膜黑色素细胞,因其血运丰富,主要经血行转移,而且特异性转移到肝脏,转移是主要的致死因素,尤其葡
由于国情、经济和文化发展等差异,我国的城市交通环境多呈现出机非混合的现象,这与欧美等发达国家有较大不同。因此研究开发基于我国城市交通运行特征的车辆行驶工况,将为车
一、"面包师"与"消防员"之说面包和面包师,社会是有着持续需求的.而消防员只有在出现火情时才被需要.英格兰银行的Sinclair有一个有趣的比喻,认为货币政策的制定者就象面包师
后交叉韧带(posterior cruciate ligament, PCL)在膝关节动态稳定性中发挥重要作用,是膝关节保持后向稳定性的主要结构。半月板是膝关节的重要组成部分,具有吸收震荡、传递负
查尔斯·狄更斯(Charles Dickens,1812-1870)是最早被译介到中国的欧美作家之一,清末民初他的五部长篇小说由林纾译介过来,此后对其作品的翻译研究就几乎没有中断过。据童真