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鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度接触性、毁灭性的传染病,给我国养禽业造成了巨大的经济损失。根据新城疫病毒感染鸡的临床症状,将其分为3类,即速发型(强毒株)、中发型(中等毒力毒株)及缓发型(弱毒株),不同毒株的致病性不同。鸡细胞因子是介导免疫系统的细胞与细胞之间信号传递的重要可溶性介质。鸡细胞因子在免疫调节和抗感染免疫中具有重要的作用。因此,为了更好的了解病原致病的潜在的过程和致病的分子机理,研究细胞因子的表达情况可以为复杂的免疫应答提供依据。本研究从细胞水平入手,以感染新城疫强、弱毒的鸡胚成纤维细胞为模型,研究了9个细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达情况,为病毒感染后细胞因子在鸡胚成纤维细胞当中生物学功能以及新城疫病毒感染的分子机理的研究提供依据。根据GenBank上鸡干扰素-α(IFN-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素2(IL-2)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、白介素13(IL-13)、白介素15(IL-15)、白介素16(IL-16)和白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因作为内参基因,采用SYBR Green I染料法,建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线。结果如下：鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×104～2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数为0.997-1.000。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,建立的鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡细胞因子的定量分析奠定了基础。用建立的Real-time PCR方法检测NDV F48E9、Lasota毒株感染后0、4、8、12、24、36小时鸡胚成纤维细胞中IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因的差异表达情况如下：IL-15和IL-18在4小时、8小时、12小时、24小时F48E9感染组、Lasota感染组与对照组差异极显著,表达量均显著低于对照组。而36小时F48E9感染组与对照组相比差异显著,F48E9感染组细胞因子IL-15和IL-18表达量快速上升,高于对照组表达量；同时Lasota感染组表达情况不一样,仍然低于对照组。IL-10一直未检测到表达。其它细胞因子的表达呈现波动性变化。结果表明,鸡IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因均参与了对NDV的免疫应答反应,其中IL-2、IL-6、IL-15、IL-16和IL-18对NDV强弱毒株感染后免疫应答模式存在明显差异。这为进一步了解NDV感染与免疫的分子机制提供了有价值的研究资料。